紫外可见分光光度计操作规程
目的：建立紫外可见分光光度计操作规程，确保其使用安全、正确。范围：适用于752型紫外可见分光光度计。操作规程：
1. 打开仪器开关，仪器使用前应预热30分钟。
2. 转动波长旋钮，观察波长显示窗，调整至需要的测量波长。
3. 根据测量波长，拨动光源切换杆，手动切换光源。200-339nm使用氘灯，切换杆拨至紫外区；340nm-1000nm使用卤钨灯，切换杆拨至可见区。
4. 调T零在透视比（T）模式，将遮光体放入样品架，合上样品室盖，拉动样品架拉杆使其进入光路。按下“调0%”键，屏幕上显示“000.0”或“-000.0”时，调T零完成。
5. 调100%T/ OA
先用参比（空白）溶液荡洗比色皿2-3次，将参比（空白）溶液倒入比色皿，溶液量约为比色皿高度的3/4，用擦镜纸将透光面擦拭干净，按一定的方向，将比色皿放入样品架。合上样品室盖，拉动样品架拉杆使其进入光路。按下“调100%”键，屏幕上显示“BL”延时数秒便出现“100.0”（T模式）或“000.0”、“-000.0”（A模式）。调100%T/ OA完成。
6. 测量吸光度
6.1 参照操作步骤3、步骤4。
6.2 在吸光度（A）模式，参照步骤5调100%T/ OA。
6.3 用待测溶液荡洗比色皿2-3次，将待测溶液倒入比色皿，溶液量约为比色皿
高度的3/4，用擦镜纸将透光面擦拭干净，按一定的方向，将比色皿放入样品架。合上样品室盖，拉动样品架拉杆使其进入光路，读取测量数据。7. 测量透视比
7.1 参照操作步骤3、步骤4。
文库
7.2 在透视比（T）模式，参照步骤5调100%T/ OA。
7.3 用待测溶液荡洗比色皿2-3次，将待测溶液倒入比色皿，溶液量约为比色皿
高度的3/4，用擦镜纸将透光面擦拭干净，按一定的方向，将比色皿放入样品架。合上样品室盖，拉动样品架拉杆使其进入光路，读取测量数据。
8. 浓度测量
8.1 参照操作步骤3、步骤4。
8.2 在透视比（T）模式，参照步骤5调100%T/ OA。
8.3 用标准浓度溶液荡洗比色皿2-3次，将标准浓度溶液倒入比色皿，溶液量约
为比色皿高度的3/4，用擦镜纸将透光面擦拭干净，按一定的方向，将比色皿放入样品架。合上样品室盖，拉动样品架拉杆使其进入光路。 8.4 按下“功能键”切换至浓度（C）模式。
8.5 按下“▲”或“▼”键，设置标准溶液浓度，并按下“确认”键。
8.6 用待测溶液荡洗比色皿2-3次，将待测溶液倒入比色皿，溶液量约为比色皿
高度的3/4，用擦镜纸将透光面擦拭干净，按一定的方向，将比色皿放入样品架。合上样品室盖，拉动样品架拉杆使其进入光路，读取测量数据。
9. 斜率测量
9.1 参照操作步骤3、步骤4。
9.2 在透视比（T）模式，参照步骤5调100%T/ OA。
9.3 按下“功能键”切换至斜率（F）模式。
9.4 按下“▲”或“▼”键，设置样品斜率。
9.5 用待测溶液荡洗比色皿2-3次，将待测溶液倒入比色皿，溶液量约为比色皿
高度的3/4，用擦镜纸将透光面擦拭干净，按一定的方向，将比色皿放入样品架。合上样品室盖，拉动样品架拉杆使其进入光路，按下“确认”键（此时仪器自动切换至浓度（C）模式），读取测量数据。
10. 测量完毕
10.1 测量完毕后，清理样品室，将比色皿清洗干净，倒置晾干后收起。
10.2 关闭电源，盖好防尘罩，结束试验。
注意事项：
1、调100%T/ OA后，仪器应稳定5分钟再进行测量。
2、光源选择不正确或光源切换杆不到位，将直接影响仪器的稳定性。
3、比色皿应配对使用，不得混用。置入样品架时，石英比色皿上端的“Q”标记（或箭头）、玻璃比色皿上端的“G”标记方向应一致。
4、玻璃比色皿适用范围：320nm~1100nm，石英比色皿适用范围：200nm~1100nm。
分光光度计，又称光谱仪(spectrometer)，是将成分复杂的光，分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源。
光度定义
分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性或定量分析。常用的波长范围为:(1)200~380nm的紫外光区，(2)380~780nm的可见光区，(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度，所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定，定期进行校正检定。
仪器组成
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。
仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
原理
分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度(光路长度)成正比，其关系如下式:
A=-lg(I/I。)=-lgT=kLc
式中 :A 为吸光度;
I。为入射的单色光强度;
I 为透射的单色光强度;
T 为物质的透射率;
k 为摩尔吸收系数;
L 为被分析物质的光程，即比色皿的边长;
c 为物质的浓度;
物质对光的选择性吸收波长，以及相应的吸收系数是该物质的物理常数。当已知某纯物质在一定条件下的吸收系数后可用同样条件将该供试品配成溶液，测定其吸收度,即可由上式计算出供试品中该物质的含量。在可见光区，除某些物质对光有吸收外，很多物质本身并没有吸收但可在一定条件下加入显色试剂或经过处理使其显色后再测定,故又称比色分析。由于显色时影响呈色深浅的因素较多，且常使用单色光纯度较差的仪器，故测定时应用标准品或对照品同时操作。
现今，国内大部分的可见分光光度计，紫外可见分光光度计有所改良。随着行业的进步，技术改良，部分厂家对于灯源更换问题的重视程度也越来越高，灯源更换也越来越方便简捷。很多新机型甚至不需要拆下整机外壳，只要打开灯源不为的盖子就能更换灯源。
分光光度计使用过程中的注意事项：分光光度计使用过程中，在不使用紫外光的情况下可以关闭氘灯（国内很多机型现在都使用的进口氘灯，用的贺利氏的氘灯较多，一般使用寿命在2000小时，国产的氘灯一般寿命在1000小时左右），关闭氘灯的话可以降低氘灯的能量损耗
分光光度计更换过程中的注意事项：
1、 关闭电源
2、 拔除电源线
3、 打开盖子到灯源部位
4、 如果是分光光度计刚使用结束，要等10分钟后在进行更换灯源（灯源刚使用完，温度比较高，防止烫到手）
5、 放电，将电路残余电压释放掉（可以接两根线到地表完成放电操作）
老款机型钨灯的更换（主要讲国产的）：
1、第一点很重要，就是带上手套，否则会污染钨灯，如果没有条件的话也要把手洗干净，防止手上的污迹污染钨灯
2、需要量取钨灯灯丝距离底座的立体位置（简单的说，距离分光光度计内三个面的位置），可以用游标卡尺量
3、部分钨灯是可以直接拔的，还有些钨灯需要用螺丝刀拆卸，也有需要通过扳手旋松的，简单讲述，就是拆下钨灯，在带手套的情况下可以直接接触灯源，未带手套的情况下，尽量避免接触灯源，拿的时候可以钨灯底座的两个触角
4、装钨灯，先把钨灯装上，起初不要把螺丝旋太紧，因为还需要调整位置
5、接下来，第二步做的工作就能用到了。根据第二步测量的位置调整钨灯，上下左右移动，直到把钨灯调整到预先测量的位置
说明
氘灯原本在可见区是没有能量的，但是却在656.1nm处出现一条氘灯的特定谱线，当氘灯的发射光束达到较佳位置时，这条特殊的谱线峰值也会达到最高，仪器正是利用这个峰值变化来监控氘灯是否调整到较佳位置的。
6、略微紧固螺丝（切记不要太紧）接入电源，打开开关，看下光斑是否打在了狭缝上，如果未打在狭缝，可以通过紧固左右螺丝来微调光斑的位置
7、钨灯更换完毕
老款机型氘灯的更换（主要讲国产的）：
1、 跟更换钨灯一样，就是带上手套，否则会污染氘灯，如果没有条件的话也要把手洗干净，防止手上的污迹污染氘灯，手指避免接触光源中心发射空位置
2、 量取发射孔的立体位置
3、 松开氘灯底座三根引线
4、 旋松螺钉，收向上推氘灯底部
5、 根据之前量取角度拜访氘灯位置，将放射孔位置调整至之前量取位置
注意事项：
(1) 光源镜背部的螺钉A为灯光束垂直方向的调整螺钉，该螺钉调整时要兼顾两个灯的能量，但主要照顾氘灯的能量，因为氘灯的能量是钨灯的1/5。
(2) 虽然大多情况下仅仅更换一只光源灯，但调整时两只灯的情况均要兼顾检查。
(3)调整后要做仪器基线平坦度及噪声水平的测试，以检验调整的效果。
(4)不同的分光仪器的灯室构造可能有所不同，但调整思路基本是一通百通的，本文仅能起到抛砖引玉的作用。
6、 开启电源，点亮氘灯，调至度数最高，旋紧螺钉即可
新款机型钨灯的更换不带灯座的步骤同上，带灯座的，直接安装，安装后只要调整螺丝松紧就能调节光斑，氘灯也是如此 。
光源灯更换后为何要调整？
分光光度计有一个技术指标，称为“基线噪声”，也就是“信噪比”，英文表示为S/N；简单地讲信噪比越大测量的结果精度越高。要想达到较佳信噪比，光源的调 整就凸现重要了；关于这个调整的物理意义，用仪器术语解释：就是让光源灯发出的实际光束与光路理论光轴完全重合。用形象语言解释：就是让光源发出的光束的 较强点完全照射到仪器单色器的入口狭缝的中央处。
由于安装光源灯的灯座一般是固定式的，加之每支灯的构造的微小差异，致使其发射出的光束在三维空 间中的位置也不尽相同；所以更换光源灯后，很难保证光束的较强点照射到狭缝的中央处，这是客观存在。为此、唯一可以补偿这一缺憾的办法就是调整光源镜的反 射角度。但是对于许多使用者而言，往往不清楚这个调整步骤的重要性。一般来讲、含有氘灯和钨灯两种光源的仪器的光源镜均可以调整。
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