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液相色谱法测定乙蒜素的含量 如何挑选购买液相色谱

时间:2020-07-20    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

   乙蒜素为我国S创绿色农药,是一种植物仿生农药,可抑制粮油、棉花、蔬菜、花卉、药材、茶叶等作物以及蚕业、渔业的数十种病菌。杀菌效果优越、活性稳定、与植物亲和力强,容易被作物吸收,快速杀灭病菌且易降解,不易产生抗性。

  乙蒜素目前已广泛应用于防治水稻烂秧病、恶苗病、稻瘟病、白叶枯病;麦类黑穗病、条纹病;棉花枯萎病、黄萎病;果树轮纹病、炭疽病;作物苗期立枯病、猝倒病、烂根病等。乙蒜素还能刺激作物生长、壮根壮苗。随着科技的发展和人们对乙蒜素认识的不断提高,乙蒜素的使用范围将会不断扩大,用量日增,市场前景广阔。

   本文采用反相液相色谱法,使用C18反相柱和紫外可见光检测器,对乙蒜素原药中有效成分进行定量分析,得到良好结果。该方法具有操作简单、准确度高、重现性好等特点,能为乙蒜素的生产质量控制和分析方法提供参考。

仪器准备

 

仪器简介

    LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等,实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。

 

应用领域

化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析

 

谱条件:

 

色谱柱

Promosil-C18(150mm×4.6mm,5μm)

检测波长

210nm

流动相

乙腈-水(30:70,V/V)

流速

  1.0mL/min

 进样量

 5μL


 

测定结果


【导读】色谱柱是高效液相色谱仪最主要的部件,被测物质能否被很好的分离和测定,色谱柱的性能起着决定性的作用。因此,在日常工作中,应特别注意色谱柱的正确使用和维修保



    色谱柱是高效液相色谱仪最主要的部件,被测物质能否被很好的分离和测定,色谱柱的性能起着决定性的作用。因此,在日常工作中,应特别注意色谱柱的正确使用和维修保养,以延长色谱柱的使用寿命。

    1、使用预柱和保护柱
    预柱(pre-column)安装于泵和进样器之间,它给色谱柱中的流动相提供了完全的平衡,并防止了对柱填料有破坏作用的组分或污染物进入色谱柱。保护柱(guardcolumn)可以阻挡能够牢固地吸附于色谱柱上的组分进入色谱柱,保护柱应与色谱柱的填料相同。预柱和保护柱可以经常更换,而不需要经常更换色谱柱,这就延长了色谱柱的使用寿命。
    2、防止气体进入
    有些色谱柱(如凝胶柱)是不允许气泡进入的,否则将会使柱效降低甚至形成微小的难以驱除的气室。因此,为了防止气泡进入色谱柱,一定要使用经过脱气的流动相,并且要严格按照下列步骤来安装色谱柱。a、拆卸下色谱柱入口处的密封螺丝,观察是否有溶剂渗出;b、如有溶剂渗出,即可将色谱柱接到管路上,以避免气泡的进入;c、如无溶剂渗出时,表明色谱柱的此端已经进去空气了,此时,可将色谱柱的出口端接到进样阀上,以流动相来反方向冲洗色谱柱,以便将柱内的空气排除。可以以0、2ml/min的小流量来冲色谱柱,如果溶剂的流速太快或者是压力突然的上升都将会导致柱性能的降低;d、如果流出的溶剂里不含有气泡,说明柱内的气体已经被排出了,再将色谱柱以正确的方向接好,这样气泡就进不到色谱柱里面了。
    3、清洗
    为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中,在每次的样品分析工作完成之后,都应及时地清洗色谱柱。首先要用对被测样品洗脱能力强的溶剂来洗脱色谱柱,以分析工作中常用的反相色谱分析法为例,因其先流出的物质是极性大的物质,此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来,洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。如果流动相是缓冲溶液,则应先用蒸馏水来冲洗色谱柱,以冲掉柱内的盐,然后再用合适的溶剂来冲洗。
    凝胶滤过色谱法(GelFiltrationChromatography)中所使用的凝胶柱常用缓冲溶液做流动相,用完之后当然要用蒸馏水来冲洗。如果是连续操作,可以将缓冲溶液置于柱内过夜,但可以是维持小流速(<0、5ml/min)以防止缓冲盐的析出,如果流动相中含有卤化物,即使是停一夜,也必须要用蒸馏水将色谱柱冲洗干净,以防止它们对柱体的腐蚀。
    4、存放
    如果色谱柱暂时不用,存放时要注意以下几点:
    a、几天之内的短期放置,应先用溶剂冲洗好色谱柱(如凝胶柱则用蒸馏水来冲洗),再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。
    b、如果色谱柱长期不用,仅用上述方法来处理就不行了,这时应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱,反相柱一般使用甲醇,正相柱则可用正已烷或庚烷,而凝胶柱则不能用水了,因柱内如果有微生物的生长则会使柱效降低,此时应用0、05%的NaNs水溶液(防腐剂)来冲洗色谱柱,再将色谱柱封严。色谱柱长期放置时,一定要将色谱柱的两端封严,以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象,因这可导致柱效的严重降低。
    c、色谱柱应贮存在室温下,如果放置于0℃以下的环境里,柱内就会结冰,这也将导致柱效的降低。





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  异常的色谱峰指的是色谱图中的无峰或出现负峰、宽峰、双峰、肩峰、峰形不对称等情况。一般来说,异常峰是实验工作中较为棘手的问题。异常峰的出现会影响色谱分析的结果。通常情况下,峰型问题是由分离系统所决定的。在做液相过程中,我们就是要变换不同的条件来改善不好的峰型,对于各种各样的异常峰,要区别对待,从主要问题出发,一个一个加以解决。
 
  1.色谱图中未出峰
 
  系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相使用不正确;检测器设置不正确
 
  2.一个峰或几个峰是负峰
 
  流动相吸收本底高;进样过程中进入空气;样品组分的吸收低于流动相。
 
  3.所有峰均为负峰
 
  信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。
 
  4.所有峰均为宽峰
 
  系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性比流动相差很多;色谱柱尺寸及类型选择不正确;色谱柱或保护柱被污染或柱效降低;温度变化造成的影响。
 
  5.所出峰比预想的小
 
  样品黏度过大;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确.定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。
 
  6.出现双峰或肩峰
 
  进样量过大;样品浓度过高;保护柱或色谱柱柱头堵塞;保护拄或色谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
 
  7.前伸峰
 
  进样量或样品浓度高,溶解样品的溶剂较流动相极性强;保护柱或色谱柱污染或失效。
 
  ①柱温低:升高柱温;②样品溶剂选择不恰当:使用流动相作为样品溶剂;③样品过载:降低样品含量;④色谱柱损坏:更换柱子。
 
  8.拖尾峰
 
  柱超载,降低样品量;增加柱直径采用较高容量的固定相;峰干扰,对样品进行清洁过滤;调整流动相;硅羟基作用,加入三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效,更换烧结不锈钢;加在线过滤器,对样品进行过滤;死体积或柱外体积过大,将连接点降至谷值;尽可能使用内径较细的连接管;柱效下降,更换柱子;采用保护柱,对柱子进行再生。
 
  9.出现平头峰
 
  检测器设置不正确;进样体积太大或样品浓度太高。
 
  10.出现鬼峰
 
  进样阀残余峰,可能为上次样品的残余。在每次进完样后用充足的时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物,改进样品的预处理;流动相污染,更换新流动相,尽可能现配现用,隔夜的流动相再次使用时要过滤;尽可能使用HPLC级试剂;流路中有小的气泡,打开Purge阀,加大流速排除。
 
  11.峰分叉
 
  ①保护柱或分析柱污染:取下保护柱再进行分析,如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞,拆下来清洗。如果问题仍然存在,可能是柱子被强保留物质污染,运用适当的再生措施。如果问题仍然存在,入口可能被阻塞,更换筛板或更换色谱柱。②样品溶剂不溶于流动相改变样品溶剂,如果可能采取流动相作为样品溶剂。
 
  12.峰变形
 
  样品过载,减少样品载量。
 
  13.早出的峰变形
 
  样品溶剂选择不恰当 ①减少进样体积 ②运用低极性样品溶剂
 
  14.早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
 
  柱外效应 ①调整系统连接(使用更短、内径更小的管路) ②使用小体积的流通池
 
  15.酸性或碱性化合物的峰拖尾
 
  缓冲不合适①使用浓度50~100 mM的缓冲液②使用Pka等于流动相pH值的缓冲液
 
  16.额外的峰
 
  (1)样品中有其他组分:正常现象;
 
  (2)前一次进样的洗脱峰:①增加运行时间或梯度斜率②提高流速;
 
  (3)空位或鬼峰:①检查流动相是否纯净 ②使用流动相作为样品溶剂 ③减少进样体积。


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