一般来说,果胶是由D-半乳糖醛酸以a-1,4糖苷键连接形成的链状杂多糖,其中,部分D-半乳糖醛酸上的羧基被甲醇所酯化形成甲酯。但是,亚麻纤维中的果胶具有一定的特殊性,其多聚半乳糖醛酸主链和侧链上都含有鼠李糖残基,而且主链鼠李糖残基上连接着主要由β-1,4-D-半乳聚糖组成的较长侧链。国内外对于亚麻纤维果胶的类型和结构特征鲜见报道。
单糖的检测常采用紫外或荧光试剂进行衍生后再用色谱方法进行分离检测以提高检测灵敏度。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)作为柱前衍生试剂,其优点在于反应条件温和,无需酸催化,不会引起去唾液酸化作用,产物无立体异构体,在245nm处有强烈的紫外吸收,已经成功用于单糖及低聚糖的分离分析。本文以混合单糖的峰面积为指标,确定了单糖Z佳衍生条件,并在此条件下对水解的亚麻纤维果胶进行分析,获得了亚麻纤维果胶的单糖组成,为亚麻纤维果胶的综合利用提供理论依据。
仪器准备
仪器简介
LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等,实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。
应用领域
化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析
色谱条件:
柱温 | 30℃ |
检测波长 | 245nm |
流动相 | 0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH值6.7):乙腈(V/V)=83:17 |
流速 | 1.0mL/min |
进样量 | 20μL |
测定结果:
液相色谱柱、特别是高效液相色谱柱的填装,需要有较高的技巧和熟练的技能。因此,有人甚至将“装柱”看作是“艺术加技术”。但是,只要掌握了一些基本的规律和方法,任何实验室都可以填装出具有较高柱性能的色谱柱。当然,目前大多数实验室多是购买商品预填装柱来满足分离、分析之需。但是在一些有特殊需要的情况下,或为节省经费,在实验室中自行填装高效液相色谱柱还是可取的。
液相色谱柱填装程序中应该注意的问题:
①高压操作的安全问题。常发生的问题是柱子与匀浆罐连接不牢,造成加压时柱头被高压冲下或柱子从匀浆罐上滑脱。此时,轻则填装失败,材料损失,重则造成人身伤害事故,一定要加以防范。除每次填装前均须仔细确认是否连接正确且牢靠外,可以还可加上由法兰盘和长螺杆组成的预防脱落装置,以防万一。
②通常,先填装的柱床较后填装的柱床紧密。因此,当使用时宜以相反的方向为宜,即让近匀浆罐一端作为使用时流动相的出口,而填装时的出口端则作为流动相的入口。
③新柱子使用前应以甲醇冲洗20-30min, 后,再改用流动相平衡。
④新柱子宜选适宜的标准样品进行评价并记录,以备存查和比较。
当样品定量管经过充分的冲洗后,可以将旋柄转回取样位置(Load),也可以继续保持在进样位置,到下次取样前才切换回取样位置。在切换回取样位置时,将样品进样针或微量样品进样针从进样阀中拔出。
为防止交叉污染,正常情况下不必每次进样后都冲洗进样阀注射针导入口。进样阀内根据专利设计的直接连接进样孔,可以使注射针头的前端直接连接到样品定量管的末端,没有其他空间供样品残留。这样在下一次进样时,就不会有上一次残留的样品进入样品定量管。
但是在进样针头插入或拔出过程中,会有痕量的样品沉积在针头密封区域。精密的测定显示这种残留有1nL ~ 10nL。这表明进20μL样品,会残留0.005% ~ 0.05%。每次进样后冲洗注射针导入口可以将此残留冲洗干净。冲洗注射针导入口的过程为:设定流动相的流速为0.1mL/min ~ 1mL/min,将注射针导入口冲洗头(Rheodyne部件号7125-054)连接到一只体积相对较大的注射器上,用大量的流动相只在进样位置清洗注射针导入口。这样进入进样阀中的液体绕过样品定量管由样品溢出管5# 口排出。这一过程可以将注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈彻底清洗。而采用注射器完全插入式的冲洗方式,则不能全部清洗上述部分的表面。在取样位置将注射针插入注射针导入口时,针头推动注射针密封圈内少量样品液体(上一次冲洗注射针导入管留下的)进入样品定量管。当该样品液体与所用的流动相组成不同,且同时采用部分充满定量管进样方式时,在高灵敏度的检测器上可能出现怪峰。所以冲洗注射针时可以用流动相冲洗。