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加强和规范色谱柱的管理有效延长使用寿命 色谱柱常见问题解决方法

时间:2020-07-23    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
     液相色谱法是20世纪70年代急剧发展起来的一项、快速的分离、分析技术。液相色谱法是指流动相为液相的色谱技术,在经典的液相色谱法基础上,引入气相色谱法理论,在技术上采用高压泵、固定相和高灵敏度检测器,实现了分析速度快、分析效率高和操作自动化,它具有高压、高速、、高灵敏度等特点。
    它是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂,缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,经进样阀注入供试品,由流动相带入柱内,在柱内各成分被分离后依次进入检测器,色谱信号由记录仪、积分仪或色谱工作站记录。
    色谱柱是液相色谱的心脏,在液相色谱仪的使用中,保持色谱柱的柱效、容量和渗透特性,延长柱子的使用寿命非常重要。
    色谱柱使用一段时间后就会出现柱压升高、柱效降低、峰形畸变和分离度降低、保留时间改变等变化,如不采取措施,将会缩短色谱柱的使用寿命,影响工作效率,并造成一定的经济损失。因此,有必要加强和规范色谱柱的管理,从而延长色谱柱的使用寿命。
    影响色谱柱使用寿命的因素
    1 流动相
    在以水溶液为流动相时,水溶液中的微生物例如细菌容易生长,当用水溶液或有机酸缓冲液保护柱子时,一些霉菌可能在色谱柱中滋生,堵塞固定相颗粒间的空隙。由于湿法填充技术的问世,目前普遍使用的色谱柱填料直径一般都小于10um,流动相中的颗粒杂质很容易先沉积在柱头然后慢慢堵塞柱子。流动相的pH值对色谱柱也有影响,特别是对化学键合硅胶填料,水溶液的pH***适范围在2~7.5之间,当pH>8时,硅胶会释出生成絮状物堵塞柱子,且难以复原,柱效很快降低,甚至完全失效。
    当在缓冲液中加入有机溶剂例如甲醇或乙腈时,盐类的溶解度下降,会析出盐沉淀,堵塞柱子。同时流动相中的有机溶剂和盐会腐蚀色谱柱头的筛板,产生柱头凹陷。流动相的极性对柱子也有一定影响,对于硅胶柱,甲醇、水、冰乙酸等极性较大物质会破坏填料;反之,对于化学键合硅胶,极性小的物质如正丁醇、二氯甲烷等也起同样的作用。碱性溶液会破坏阳离子交换树脂色谱柱,而酸性溶液容易损坏阴离子交换树脂柱。
    2 样品和固定相
    如果有少量或微量的样品不能够溶解在流动相中,在通过固定相会堵塞柱子,样品中的颗粒杂质也会堵塞柱子。样品组分例如糖、蛋白质等通过柱子时会产生不可逆吸附,这样固定相的活性点被覆盖。样品组分还会与固定相产生反应,尤其是对于氨基柱的影响较为严重。因为氨基易与酐、酮形成希夫(Schiff)缩合而减少活性点,使保留时间缩短。色谱柱键合相基团脱落、固定相分解和活性基团变性以及会影响柱效和保留时间的显著改变。大多数键合相都是通过硅氧硅键(Si-O-Si)连接在硅基质上,形成带有有机基团的固定相Si-O-Si-R(R为CnH2n+1),硅氧硅键可能在水溶液中水解而断裂,使键合基团脱落。
   
   离子色谱柱日常维护及保养:
  
  1、色谱柱中应封存淋洗液保存,保存温度4-10摄氏度,使用温度20-60摄氏度。
  
  2、国产NJ-SA-4A色谱柱应在pH2-12范围内使用,淋洗液及样品浓度均不能超出此范围。进口Shodex IC 色谱柱应在pH3-12范围内使用,淋洗液及样品浓度均不能超出此范围。
  
  3、色谱柱zui大使用压力不能超过15MPa
  
  4、拆下色谱柱时,应在色谱柱温度降至室温后拆下,拆下后立刻以堵头密封.
  
  5、含有重金属的样品,应以阳离子交换树脂处理后,去除重金属才能进样
  
  6、含有有机物的样品,应过C18固相萃取柱后进样
  
  7、样品硬度较高时,应先去除样品中的钙镁离子
  
  8、样品进样前必须以0.22μm微孔滤膜过滤或一次性针头过滤器过滤。
  
  9、室温保存色谱柱时,应每周通淋洗液一次。
  尺寸排阻色谱柱通过优化填料的粒径和细孔容积,实现了色谱柱性能的提升,和色谱柱操作压强的降低。特别是对单克隆抗体三聚体/二聚体/单体的分离性能有很大的提高,对单体/片段也有很好的分离效果。
  尺寸排阻色谱柱采用单分散、球形、表面键合了一层纳米厚度中性亲水性薄膜的3 ?m硅胶作为填料。3μm的粒径结合大的孔体积使其成为目前国际上分辨率优良的体积排阻柱。成都摩尔科学仪器有限公司独有的表面键合技术保证了填料表面键合的很大化,使其具有高的化学稳定性及小的非特异性吸附。尺寸排阻色谱柱体积排阻柱有100、150及300三种孔径选择,广泛的应用于生物分子及水溶性聚合物的分离与分析。
  尺寸排阻色谱柱的保存:日常使用中,Sepax SEC色谱柱建议保存在150mM磷酸盐缓冲液中(pH7.0)。如长期不用时,可将色谱柱保存至20%乙醇中,以防止菌体污染。(注:可根据具体使用条件选择保存方式,如实验条件为缓冲盐体系,建议保存在150mM磷酸盐缓冲液中,pH 7.0。若实验条件为有机溶剂体系,建议保存在20%乙醇中。)
  尺寸排阻色谱柱的清洗:多次使用后某些样品可能会吸附到入口筛板或填料上,当积累至一定程度时会出现压力升高并伴随峰型展宽的现象,此时需要清洗色谱柱。一般流程为:断开检测器,反接色谱柱,在低于50%较大推荐流速下用清洗液冲洗10-15倍柱体积。
  尺寸排阻色谱柱是7.8 mm ID X 30 cm通用尺寸的高性能SEC色谱柱。采用以亲水性乙烯基聚合物为基材的高亲水性填料充填,因此适合用于分析水溶性聚合物。对于分子量较小的肽、蛋白质聚合物、DNA片段和病毒的分析,TSKgel PL 色谱柱具有很好的分离效果。
  尺寸排阻色谱柱由亲水性球形聚甲基丙烯酸酯颗粒填充。尺寸排阻色谱柱的主要应用范围在于分析水溶性聚合物,如纤维素、丙烯酰胺、二醇、葡聚糖、聚乙烯醇和低聚糖等。化学修饰的尺寸排阻色谱柱提高了阳离子型聚合物的回收率。



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