做液相色谱的同学基本都会碰到分叉峰,很多时候,这都意味着硬件或者方法某些地方可能出现问题。今天我们就一起看看导致峰分叉的原因,以及如何解决这个问题。
首先,我们需要判断这到底是一个峰,还是两个峰?
A图主峰前面有一个肩峰
这到底是峰形不好,还是另外一个化合物没分开呢?
判断方法:降低该成分在样品中的浓度
B图是降低该成分浓度后进样后得到的色谱图,如果这是一个峰那肩峰也应该响应变小,但是这个例子里,肩峰没有变小这应该是另外一个化合物。这时候,我们就要考虑如何改变方法,将这两个东西分开。
如果所有峰的峰形都不好
一般来说,一个样品都会出多个峰,绝大多数时候在每个峰上面都出现肩峰比如像下面这样:
这种情况一般都是管路连接、液相色谱柱头塌陷或者柱头的筛板被堵导致的。
如何解决液相色谱柱头筛板被堵的问题呢?
01反冲
柱出口放空,冲20-30ml流动相。虽然液相色谱柱上都有表明使用方向,但是对于硅胶基质的色谱柱基本都可以反冲。
将柱头污染物如泵密封圈的碎屑,样品中的污染等冲走,就能解决问题。
02更换或清洗筛板
现在估计做这个事情的人不多,但是如果有废的液相色谱柱,想练练也未尝不可。将筛板取下来,用超声波清洗器清洗,晾干后安装;如果清洗后依然没有效果则需要更换新的筛板。
当然,还是要提倡大家注意样品上机之前的前处理和及时更换磨损的泵密封圈。有条件的还是用保护柱,大不了就换保护柱,也比换色谱柱成本更低。
贮液装置、高压输液泵、过滤器、脱气装置等
1. 贮液器:贮液器用于存放溶剂。溶剂必须很纯,贮液器材料要耐腐蚀,对溶剂呈惰性。贮液器应配有溶剂过滤器,以防止活动相中的颗粒进进泵内。溶剂过滤器一般用耐腐蚀的镍合金制成,空隙大小一般为2mm。
2. 脱气装置:脱气的目的是为了防止活动相从高压柱内流出时,开释出气泡进进检测器而使噪声剧增,甚至不能正常检测。
3. 高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪的重要部件,是驱动溶剂和样品通过色谱柱和检测系统的高压源,其性能好坏直接影响分析结果的可靠性。
对高压泵的基本要求是:
①流量稳定;②输出压力高,最高输出压力为50Mpa;③流量范围宽,可在0.01~10ml/min范围任选。④耐酸、碱、缓冲液腐蚀。⑤压力波动小。
2. 梯度洗脱装置 梯度洗脱是利用两种或两种以上的溶剂,按照一定时间程序连续或阶段地改变配比浓度,以达到改变活动相极性、离子强度或pH值,从而进步洗脱能力,改善分离的一种有效方法。当一个样品混合物的容量因子是范围很宽,用等度洗脱时间太长,且后出的峰形扁平不便检测时,用梯度洗脱可以改善峰形、并缩短分离时间。HPLC的梯度洗脱与GC的程序升温相似,可以缩短分析时间,进步分离效果。使所有的峰都处于较佳分离状态,而且峰形尖而窄。
二. 进样器
进样器一般要求密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力和流量波动小,并便于实现自动化。
高压进样阀是目前广泛采用的一种方式。阀的种类很多,有六通阀、四通阀,双路阀等。以六通进样阀较为常用。
三.分离系统
色谱分离系统包括色谱柱、固定相和活动相。色谱柱是其核心部分,柱应具备耐高压、耐腐蚀、抗氧化、密封不漏液和柱内死体积小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱寿命长的要求。通常采用优质不锈钢管制成。
色谱柱按内径不同可分为常规柱、快速柱和微量柱三类。
常规分析柱柱长一般为10~25cm,内径4 ~ 5mm,固定相颗粒直径为 5 ~ 10 mm。为了保护分析柱不受污染,一般在分析柱前加一短柱,约数厘米长,称为保护柱。
(微量分析柱内径小于l mm,凝胶色谱往内径3~12 mm,制备往内径较大,可达25 mm以上。)
四. 检测系统
检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号,常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
液相色谱仪如何选购
杭州森尼欧科学仪器有限公司专业提供二手液相色谱仪。不管是新仪器还是二手液相色谱仪,如何选择液相色谱仪,都有一定的方法,此篇文章希望能帮助您更好地了解和使用液相色谱仪
一.主要技术指标优异:
首先是如何看指标。液相色谱仪的指标很多,有泵的、检测器的、色谱柱等等。我们认为要看主要技术指标,根据国家标准,仪器的主要指标有噪音,漂移,zui小检测浓度,定性定量重复性等。这些指标都要放在系统,回路里去看,去比较。就是需要把各单元装置都要联接好,如接好色谱柱,进样阀,并且要通上流动相。因为您在分析中也都是联接好以后才可以进行分析的,而不是单单用个检测器或是泵的。
然后在这个基础上,我们再去比较这些主要指标。
1.噪音
是指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动。噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度,噪音越大,检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好,否则噪音过大将会导致基线不稳,甚至影响分析结果。
2.zui小检测浓度(zui小检测限)
是反映仪器灵敏度的重要参数。CL=2×Nd×C/H(CL :zui小检测浓度 Nd:噪音C:样品浓度zui小检测浓度H:样品峰高)由上式可见,zui小检测浓度是和噪音成正比的,噪音越大,zui小检测浓度就越大,灵敏度就越低。某些厂家回避了这个指标,说明他们不愿在zui小检测浓度的基础上去比较噪音。
3.漂移
是指仪器稳定后一段时间内基线漂离原点的距离,通常用来衡量仪器稳定快慢。高品质的仪器能在较短的时间内达到稳定,从而在一定程度上提高了分析效率。
4.定性定量重复性
主要是考核仪器稳定性的指标,这对于分析样品来说是非常重要的。好的仪器其稳定性应该是十分的,这就要求多次进样保留时间及含量的一致性,这样做出来的结果才能使人信服。
二.系统的,整体开发
这里指的是仪器的整体开发,是一个完整的系统。目前市场上有这个现象,说我的泵是进口的,或者是检测器怎么好,用了什么很多的进口件组装等等。其实这是个误区。液相色谱是个复杂的系统,不是整体开发的,各项指标之间、软件和硬件、硬件和硬件等都不匹配,整体水平不会高到哪里去,而且在售后服务方面对用户也是不负责任的。
整体开发的主要优点有:各项技术指标统一、仪器各单元的通信协调、能够建立一个整体的数字化评价系统、体现了企业的科技及开发实力。
国外知名的仪器生产厂家的产品也是整体开发的,所以能够保证仪器的整体水平。
三.操作方便:
操作方便性无论是对新手还是成熟的用户都是很重要的。操作越简单,有利于提高分析效率,也为以后分析方法的拓展提供有力的帮助。
四.稳定可靠,故障率低.
希望以上文字能帮助您。杭州森尼欧科学仪器有限公司提供二手液相色谱仪岛津系列以及其它液相、液相耗材等。咨询或也可带样品至我司现场检测。浏览本公司二手液相色谱仪产品请点击本展台目录。