01
复色光对朗伯-比尔定律的偏离
朗伯-比尔定律成立的前提条件是入射光是单色光，但是精度再高的仪器，即使是双单色器的分光光度计，也只能获得近乎单色的光，无法获得纯单色光，它仍然含有狭窄光通带，具有复色光的性质。而复色光会导致朗伯-比尔定律的正或负偏离。
固定狭缝的紫外分光光度计光谱带宽一般为1nm或2nm，可调狭缝的可以做到0.Inm；可见分光光度计带宽6nm、甚至十几纳米。
光谱带宽应该是越小越好，但是随着光谱分辨率的提高，仪器的灵敏度降低，所以选择仪器时要综合考虑各种条件的影响。当溶液浓度较小且单色光较纯时，可近似认为符合朗伯-比尔定律定律。
02
杂散光的影响
杂散光是指进人检测器的处于待测波长光谱带宽范围外的其他波长组分，它是光谱测量中误差的主要来源。
产生原因有:分光光度计的色散元件、反射镜、透镜及单色器内壁灰尘等。在分光光度计工作波段边缘波长处，由于单色器透光率、光源辐射强度、检测器灵敏度都较低，杂散光的影响更为显著。
杂散光限制仪器的分析上限可引起严重的测量误差，实际工作中，在定量分析时，一般在吸收峰或其附近处测量样品吸光度，如果在分析波长处含有杂散光，这时样品的透光率较小，而杂散光大部分透过，使测量吸光度低于真实吸光度。
03
仪器噪声对测T的影响
仪器噪声也是仪器的一个重要指标，它表征仪器做稀溶液的能力。是叠加在待测量的分析信号中的不需要的信号，扫描100%T和0%T线，可观察到分光光度计的噪声水平，如果仪器噪声较大，会掩盖较小的测量信号，一般用噪音的二倍来表示仪器的灵敏度。
04
波长和吸光度准确度
样品的每一个值都是在一定的波长下测得的，如果波长误差很大，测出的值肯定不准。吸光度准确度也是用户对仪器的直接要求，更应引起足够的重视。
国家计量检定规程规定双光束紫外可见分光光度计透射比准确度为A级士0.6%， B级土1.0%。
我们如何来评价一台紫外可见分光光度计的优劣呢？首先，我们要来考察它的外观。然后，我们探讨一下会对仪器的使用有很大影响的几个重要指标：
1、杂散光它指不应该有光的地方有了光。
它是光谱测量中误差的主要来源。这个值当然越小越好了。
2、光度准确度光度准确度指实际测量的光度读数值与真值之差。
它是用户对仪器的直接要求，每个用户都必须重视。
3、噪声噪声也是仪器的重要指标之一。
它表征仪器的做稀溶液的能力。这个指标也是越小越好。
4、光谱带宽指从单色器射出的单色光谱线强度轮廓曲线的1/2高度处的谱带宽度。
表征仪器的光谱分辨率。按照比耳定律，光谱带宽应该是越小越好的，但是如果仪器的光源能量弱，光学传感器的灵敏度低时，光谱带宽小了，也得不到理想的测量结果的。所以，选择和使用仪器时一定注意。
5、稳定性稳定性是使用者较受关注的指标之一。
仪器的宗旨就是稳定可靠，不稳定更谈不上可靠了。
6、噪声噪声也是仪器的重要指标之一。
它表征仪器的做稀溶液的能力。这个指标也是越小越好。
7、波长的准确度和重复性仪器的每个值都是在一定的波长下测得的，如果所示的波长和实际波长偏差万里，那么测出的值和真值的吻合度从何谈起呢？可见这个指标的重要性。
总之，这几个指标都是相互独立又相互关联的，每个指标对仪器的使用都有很大影响。希望大家在选购紫外、可见分光光度计时，多做比较，多做判断，切实找到一个稳定可靠的好帮手。
我们选择时需要根据自己实验室的需要，主要考虑光学构造和光源、检测方法、样品类型和数据处理等因素。
1.光学构造
一般来说，紫外光分光光度计分为单光束和双光束两类。1单光束型主要是依赖单束光进行测量。一束给定波长的光通过对照物，然后再通过实际样品溶液，就能得到吸光结果。
双光束型则是通过一个斩光轮（mirroredchopperwheel）将一束光分成两束，分别测量对照样品和实际样品。可以最小化光漂移（lampdrift）和减少测量时间。一些双光型光度计不利用斩光轮，而是利用一种光束分光器来代替，将一束光分成两束平行的光然后同时测量对照样品和目的样品。因为增加了测量的速度，所以双光束分光光度计在测量一些溶液随时间动态变化的研究中大有用处。
2.样品类型
在大部分的样品类型中，分光光度计可接受样品孔、小玻璃管cuvette、吸浆管和微孔板。
用小试管装样品容量一般从1μl-5ml，并且一些仪器装备了各种样品固定物来满足各种改变需要。
3.光源和检测方法
分光光度计的光谱也是需要考虑的一个重要因素。
紫外分光光度计一般覆盖190nm和380nm波长，通常利用氘灯照明。一些特殊的仪器可以提供满足光子学和半导体研究需要的光谱范围。
有的仪器可以选择多种光源：紫外光、可见光和甚至红外光（780nm至3,000nm）。钨灯和卤素灯一般只覆盖可见光部分（大约380nm到800nm）。而氙灯则可以覆盖紫外光和可见光区域。
分光光度计的带宽（bandwidth）很大程度上依赖于单色仪的狭缝的宽度。可以投射出实验精确要求的光谱。一种严格带宽使得仪器能对复杂的混合物进行高分辨率的吸光测量。可变的单色仪的狭缝宽度能使一台分光光度计满足多种实验需要。
4.样品类型
在大部分的样品类型中，分光光度计可接受样品孔、小玻璃管cuvette、吸浆管和微孔板。
用小试管装样品容量一般从1μl-5ml，并且一些仪器装备了各种样品固定物来满足各种改变需要。
5.数据管理
大部分单机型的分光光度计包含了驱动仪器运行和管理数据的软件。高性能的仪器，通常与PC机一起联用，需要从制造商提供额外的软件。
由此可见紫外、可见分光光度计是一种常规的实验室分析仪器。可广泛用于无机物、有机物的定性、定量分析中，在科研、制药、化工、环保、卫生、防疫等领域中发挥重要的作用。
紫外可见分光光度计是按照物质的吸收光谱来对其成分、结构以及相互作用进行研究的一种仪器。紫外可见分光光度计拥有分析成本低、操作简便、快速、准确度高等众多优点，无论在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学研究领域，还是在化工、医药、环境检测、冶金等现代生产与管理行业，都获得了日益广泛的应用。
在使用紫外可见分光光度计时，必须要注意一些使用后的维护保养和一些基本使用注意事项，才能达到更好的使用效果。
1、使用的吸收池必须洁净，并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。
2、取吸收池时，手指应拿毛玻璃面的两侧，装盛样品以池体的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无溶剂残留。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净，晾干防尘保存。
3、启动仪器之前，一定要把样品室内存放的防潮剂拿出，仪器进行正常运转检查的时候，千万不能开启样品室盖。
4、要求比色皿当中的液体占总体积的66%-80%较佳，千万不能让液体太多，以致于液体外泄腐蚀仪器；正常检测的时候，需要保证比色皿干净，内壁上液滴需要使用专业的纸进行擦拭，千万不能使用手进行直接的擦拭。
5、供试品溶液浓度除各该品种已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之间为宜。
6、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。
7、正常运转的时候，严禁把液体溶剂放置于仪器的表层上，如果出现液体外泄的情况，一定要保证进行及时的清洁处理。
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