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液相色谱法测定亚麻纤维果胶单糖 液相色谱常见问题解决方法

时间:2020-07-25    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     

   一般来说,果胶是由D-半乳糖醛酸以a-1,4糖苷键连接形成的链状杂多糖,其中,部分D-半乳糖醛酸上的羧基被甲醇所酯化形成甲酯。但是,亚麻纤维中的果胶具有一定的特殊性,其多聚半乳糖醛酸主链和侧链上都含有鼠李糖残基,而且主链鼠李糖残基上连接着主要由β-1,4-D-半乳聚糖组成的较长侧链。国内外对于亚麻纤维果胶的类型和结构特征鲜见报道。

   单糖的检测常采用紫外或荧光试剂进行衍生后再用色谱方法进行分离检测以提高检测灵敏度。采用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)作为柱前衍生试剂,其优点在于反应条件温和,无需酸催化,不会引起去唾液酸化作用,产物无立体异构体,在245nm处有强烈的紫外吸收,已经成功用于单糖及低聚糖的分离分析。本文以混合单糖的峰面积为指标,确定了单糖Z佳衍生条件,并在此条件下对水解的亚麻纤维果胶进行分析,获得了亚麻纤维果胶的单糖组成,为亚麻纤维果胶的综合利用提供理论依据。

仪器准备

 

仪器简介

    LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等,实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。

 

应用领域

化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析

谱条件:

 

柱温

30℃

检测波长

245nm

流动相

0.05mol/L磷酸盐缓冲液(pH值6.7):乙腈(V/V)=83:17

流速

  1.0mL/min

 进样量

 20μL


 

测定结果

分析液相色谱仪的常规部件
  液相色谱仪由包括输液系统,进样系统,分离系统,检测系统,数据处理系统,输助设备(色谱柱恒温箱等)几大部分组成的。但是在机器工作的同时还需要样本处理设备的支持。只有各个部分都能协调的运作才能发挥出机器的较佳的性能。因此我们在选择仪器的时候需要充分考虑到仪器的方方面面才能拿到自己满意的机器。

  首先从常规的几个部件做个简单的分析。

  (一)输液泵应具备如下性能:

  ①RSD(流量稳定性)<0.3%;

  ②流量范围宽,0.1~5.0ml/min内连续可调,有的实验则需要更大流量;

  ③输出压一般应能达到150~400kg/cm2,流量越大,最高压力越低;

  ④液缸容积小,有助于减少流动相死体积,利于清洗。

  ⑤密封性能好,耐腐蚀。

  (二)检测器

  ①紫外检测器,分为可变单波长检测器VWD和二极管阵列检测器DAD,可以检测有紫外吸收的物质

  ②荧光检测器,检测有荧光的物质

  ③视差折光检测器,通用型检测器,但对环境要求极为苛刻,而且灵敏度低

  ④ELSD,蒸发光散射检测器

  ⑤MSD,质谱检测器

  常用的是紫外检测,然后是MSD和ELSD

  (三)色谱柱

  要求柱效高、选择性好,分析速度快等。目前市场上销售的用于HPLC的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、氧化铝、多孔碳等,其粒度一般为3,5,7,10μm等,柱效理论值可达5~16万/米。

  一般的分析只需5000塔板数的柱效;同系物分析500即可;难分离物则可用2万的柱子。

  因此一般10~30cm左右的柱长基本能满足复杂混合物分析的需要。所以要根据自己实际情况来选择合适的柱子。

  柱效受柱内外因素影响,为使色谱柱达到较佳效率,除柱外死体积要小外,还要有合理的柱结构(尽可能减少填充床以外的死体积)及装填技术。即使可以的装填技术,在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的,靠近管壁的部位比较疏松,易产生沟流,流速较快,影响冲洗剂的流形,使谱带加宽,这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中,柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。

  此外,温度在色谱分析中是个不容忽视的环境条件,环境温度对溶剂的溶解能力、色谱柱的性能、流动相的粘度都有影响。而且不同的检测器对温度的敏感度不一样。保持恒定的温度对实验而言是个绝对不容忽视的条件,因此也要留意注温箱的选择。以保证实验结果的准确性。

  (四)进样器

  进样装置要求:密封性好,重复性好,死体积小,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力、流量影响小。而且进样方式多种多样,可分为隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。自动进样器则是市场发展的趋势。

  (五)数据处理系统

  一般专业的液相色谱仪生产厂家都有自己配套的液相色谱仪控制软件。但有不少液相色谱仪可以使用通用型的色谱数据工作站进行数据计算处理。进口软件价格比较高,这个自己得根据资金选择了。

标签: 液相色谱仪
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液相色谱柱的使用和注意事项

  色谱柱在使用前,可以进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是较佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。  1、样品的前处理;  a、可以使用流动相溶解样品;  b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质;  c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。  2、流动相的配制  液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点:  a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中(或长期留在柱中);  b、流动相与样品不产生化学反应;  c、流动相的黏度要尽量小,以便得到好的分离效果;降低柱压降,延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度);  d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器,可以使用对紫外吸收较低的溶剂配制;  e、流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行;  f、在流动相配制好后,一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。  3、流动相流速的选择  因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的色谱柱,要追求较佳柱效,可以使用较佳流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml/min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml/min为佳。  当选用较佳流速时,分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量)。  注意:  a.含水流动相可以在实验前配制,尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。可以加入叠氮化钠,防止细菌生长;  b.流动相要求使用0.45μm滤膜过滤,除去微粒杂质;  c.使用HPLC级溶剂配制流动相,使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命,提高柱性能。

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