高效液相色谱仪中，保护柱安装在进样器和分析柱之间，通过流动相和样品溶液。保护柱是液相色谱分析中重要的色谱耗材，使用保护柱可大大降低分析柱受污染的程度，延长分析柱使用寿命。保护柱位于进样器与分析柱之间，作用主要两方面：
1.截留不溶性颗粒
2.吸附样品基质中的杂质
一、如何选择保护柱：
1.保护柱的填料，与分析柱保持一致!填料品牌一致，才能100%确保选择性一致。
2.保护柱的规格，要与分析柱匹配!填料粒径一致，保护柱的内径与分析柱的内径相近。
3.对于精细分离，保护柱本身的装填柱效要足够好!
4.对于精细分离或者小内径色谱柱分离，保护柱的连接死体积要尽可能小。
5.如果是用于UHPLC柱，还要考虑保护柱的耐压能力。
保护柱不理想，就会导致峰扩散，分离度下降，不利于精细分离。
理想的保护柱，即使分析柱短小如4.6×100mm，安装保护柱后也未引起分离度与峰高的降低。
二、如何使用保护柱：
1.专柱专用。避免保护柱成为不同项目的交叉污染源。
2.及时更换保护柱。当峰的理论塔板数下降15%，或是柱压上升15%，或是关键分离度下降15%时，都应该及时更换保护柱。
3.不慎发生强污染时，可以将分析柱卸下，单独冲洗保护柱，可以使污染物更快的从保护柱中流出。——但是不可以超声保护柱。
三、保护柱使用注意事项：
1.独立式保护柱与分析柱连接时，连接管路尽可能短，且接口切面平滑，尽量减少死体积以降低柱外展宽效应。
2.卡套式保护柱一般未标注液流方向，使用时建议自行标注，并按照标注方向来使用，以免正反向使用后，截留的杂质污染分析柱。
3.直接填装的短柱型保护柱，出现柱压升高或峰型变差时，可不接分析柱进行反向清洗，清洗溶剂可参考分析柱清洗溶剂。
4.卡套式保护柱，柱芯替换时，注意柱芯与柱套是否存在方向上的匹配，同时不易旋拧过紧，以防滑丝。
5.保护柱或柱芯一般不建议超声清洗，因可能对填料表面修饰有影响。
6.如同一保护柱配不同的分析柱使用，每次使用前，保护柱需先清洗并用流动相平衡保护柱一段时间后，再接分析柱使用。
高速逆流色谱法于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术，与其它色谱技术不同的是它不需任何固态载体，因此能避免固相载体表面与样品发生反应而导致样品的污染、失活、变性和不可逆吸附等不良影响。
同时它也具有适用范围广、快速、进样量大、费用低、回收率高等优点。因此，己在生物、医药、食品、材料、化妆品和环保等领域获得了广泛的应用，尤其是在天然产物活性成分的分离纯化领域倍受重视。
高速逆流色谱仪原理及特点
HSCCC利用了一种特殊的流体动力学（单向流体动力学平衡）现象。具体表现为一根100多米长的螺旋空管，注入互不相溶的两相溶剂中的一相作为固定相，然后作行星运动；同时不断注入另一相（流动相），由于行星运动产生的离心力场使得固定相保留在螺旋管内，流动相则不断穿透固定相；这样两相溶剂在螺旋管中实现高效的接触、混合、分配和传递。由于样品中各组分在两相中的分配比不同，因而能使样品中各组分得到分离。
重现性好。如果样品不具有较强的表面活性作用，酸碱性也不强，那么多次进样，其分离过程稳定性都保持很好、峰的保留相对标准偏差也小于2%，重现性相当好。
应用领域：
（1）天然产物已知有效成分的分离纯化
（2）化学合成物质的分离纯化
（3）中药一类、五类新药的开发
（4）中药指纹图谱和质量控制研究
（5）抗生素的分离纯化
（6）天然产物未知有效成分的分离纯化（新化合物开发）
（7）海洋生物活性成分的分离纯化
（8）放射性同位素分离
（9）多肽和蛋白质等生物大分子分离以及手性分离等
应用范围广，适应性好。由于溶剂系统的组成与配比可以是无限多的，因而从理论上讲HSCCC适用于任何极性范围的样品的分离，所以在分离天然化合物方面具有其独到之处。并因不需固体载体，而消除了气液色谱中由于使用载体而带来的吸附现象，特别适用于分离极性物质和其它具有生物活性的物质。
我们不应该在仪器有故障反映时才想到应该对仪器进行维护，不仅要定期有目的地做，还要树立一个观念 ，维护与保养的一个重要作用就是保障保证一个良好的检测状态，确保得到准确的检测数据，影响分析仪器的可持续运行有因素主要有：
1.易损件清理更换不及时;
2.硬件使用不科学;
3.仪器本身选购及配置不当;
各种分析仪器从结构、功能、应用各方面差别极大，但是经常出的问题以及维护保养的方向还是有一定的共性。这种共性就是：“仪器本身各个固定部件很少出问题，只有使用者经常接触到的地方才容易出故障”。
下面分别就气相色谱仪的常见故障及常用维护：
在使用气相色谱仪时(以下主要以配有分流进样口和氢火焰检测器的气相色谱仪为例)，使用者经常做的对仪器结构有改变的行为莫过于换柱了，虽然换柱和扎针一样，都是气相色谱工作者的基本功，但是，至少有一半的问题与之相关。
问题1：漏气
进样垫漏气，接柱的固定螺丝漏气，尤其是使用填充柱而又采用硅石墨垫更会如此。如果用橡胶圈好些，但是不需用，需要定期更换。毛细柱由于采用石墨垫圈则漏气问题相对好些。
问题2：固定位置不准：
这是制约灵敏度的一个关键点。填充柱由于是刚性的，尺寸形状固定，在换装时，一般容易掌握。常出问题的是毛细柱，由于其本身柔性，在进样口和检测器内的长度完全由使用者个人掌握，如果把握不准，会成为制约实验效果的一个重要因素。不同公司仪器的装柱尺寸是不同的，在使用不同衬管时也有很大区别。有些仪器提供了专用的测量工具，有些则没有。
问题3：清理更换不及时：
这是硬件无故障而检测状态不好的主要原因，其具体表现就是污染，如，进样口衬管及玻璃棉污染，柱内污染，检测器污染，如果不及时更换或清洗，会造成基线不稳，灵敏度下降等现象。
对策：
定期清洗，定期更换，用检漏液测漏，是常用但不是zui好的处理方法。我觉得，zui好的方法是状态监控，时刻观察系统状态，发现问题马上判断问题再处理问题。同一台机，同一根柱，在同流量，同柱头压下，应该有基本一致的信号基线和差不多的稳定时间，仪器状态的不同问题会有各种不同的反映。
例 1 ： 装柱后，通上一定的流量，柱头压和平时不一样。如果柱头压明显比平时高，可能是柱头堵塞。如果低，可能是漏气或柱断裂，漏气可以在关闭柱箱风扇后应该能听到声音，柱断裂可以很容易看出来。
例 2： 流量正常，柱头压正常，但基线信号明显地低且稳定奇快。这种现象在使用毛细柱时常发生，原因多半就是喷嘴堵塞。确定是否这个原因的方法就是进空白溶剂，如果信号比平时低了很多，而且出峰时间又晚了一些，就基本就是这个原因，这时只能关机清洗。
例 3 ： 流量正常，柱头压正常，在三温(OVEN，INJ，DET)到达设定值后，但基线信号明显地偏高且不稳定。这种情况多是污染。污染又分：进样口污染，柱污染，检测器污染。确定是哪一种故障并不容易(有时还是交叉反应)，但是处理方法却一致：停机-清洗-升温烤。我建议每次清洗zui好把检测器和进样口都处理一下，毕竟最耗时间的是降温升温。
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