分光光度计的具体使用方法：
（1）仪器预热。打开样品室盖（光门自动关闭）。开启电源，指示灯亮，仪器预热20min。选择开关置于“T”旋钮，使数字显示为“00.0”。
（2）旋动波长手轮，把所需波长对准刻度线。
（3）将装有溶液的比色皿放置比色架中，令参比溶液置于光路。
（4）盖上样品室盖，调节透光率“100％T”旋钮，使数字显示为“100.0T”。（如显示不到100％T，则可加按一次。
（5）吸光度A的测量：仪器调T为0和100％后，将选择开关转换至A调零旋钮，数字显示应为“.000”。然后拉出拉杆，使被测溶液置入光路，数字显示值即为试样的吸光度A。
（6）测定完毕后，先打开样品室盖，再断电源。比色杯应清洗干净后，再贮放保存。
分光光度计计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光源透过测试的样品后，部分光源被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。
分光光度计的基本工作原理
分光光度计的基本工作原理是基于物质对光（对光的波长）的吸收具有选择性，不同的物质都有各自的吸收光带，所以，当光色散后的光谱通过某一溶液时，其中某些波长的光线就会被溶液吸收。在一定的波长下，溶液中物质的浓度与光能量减弱的程度有一定的比例关系，即符合比尔定律。
T=I/Iolg（Io/I）=εcb
式中，T为透过率，Io为入射光强度，I为透射光强度，A为消光值（吸光度），ε为吸收系数，b为溶液的光径长度，c为溶液的浓度。从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液厚度一定时，透光率是根据溶液的浓度而变化的。
在使用分光光度计时，我们必须要注意一些使用后的维护，保养，和一些基本使用注意事项，才能达到更好的使用效果。
分光光度计的使用维护：
1、使用的吸收池必须洁净，并注意配对使用。量瓶、移液吸管均应校正、洗净后使用。
2、取吸收池时，手指应拿毛玻璃面的两侧，装盛样品以池体的4/5为度，使用挥发性溶液时应加盖，透光面要用擦镜纸由上而下擦拭干净，检视应无溶剂残留。吸收池放入样品室时应注意方向相同。用后用溶剂或水冲洗干净，晾干防尘保存。
3、供试品溶液浓度除各该品种已有注明外，其吸收度以在0.3～0.7之间为宜。
4、测定时除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm石英吸收池，在规定的吸收峰±2nm以内，测几个点的吸收度或由仪器在规定的波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸收度最大的波长作为测定波长，除另有规定外吸收度最大波长应在该品种项下规定的测定波长±2nm以内。
5、供试品应取2份，如为对照品比较法，对照品一般也应取2份。平行操作，每份结果对平均值的偏差应在±0.5%以内。
6、选用仪器的狭缝宽度应小于供试品吸收带的半宽度，否则测得的吸收度值会偏低，狭缝宽度的选择应以减少狭缝宽度时供试品的吸收度不再增加为准，对于大部分被测品种，可以使用2nm缝宽。
7、单色器是仪器的核心部分,装在密封盒内不能拆开,为防止色散元件受潮发霉,必须经常更换单色器盒干燥剂。
8、光电转换元件不能长时间曝光,应避免强光照射或受潮积尘。
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