荧光分光光度计是什么呢?荧光分光光度计计是用于扫描液相荧光标记物所发出的荧光光谱的一种仪器,具有灵敏度高、选择性好、操作简便等优点。荧光分光光度计主要由哪些部件组成呢?下面小编就来具体介绍一下,希望可以帮助到大家。
1. 光源:
为高压汞蒸气灯或氙弧灯,后者能发射出强度较大的连续光谱,且在300nm~400nm 范围内强度几乎相等,故较常用。
2.激发单色器:
置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器,筛选出特定的激发光谱。
3.发射单色器:
置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器,常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。
4. 样品室:
通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时,光源与检测器成直角安排;测量固体时,光源与检测器成锐角安排。
5. 检测器:
一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。
分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后,发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸收光能量的情况也就不会相同,因此,每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线,可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量,这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。它是带状光谱,反映了分子中某些基团的信息。可以用标准光图谱再结合其它手段进行定性分析。
根据Lambert-Beer定律说明光的吸收与吸收层厚度成正比,比耳定律说明光的吸收与溶液浓度成正比;如果同时考虑吸收层厚度和溶液浓度对光吸收率的影响,即得朗伯-比耳定律。即A=εbc,(A为吸光度,ε为摩尔吸光系数,b为液池厚度,c为溶液浓度)就可以对溶液进行定量分析。
将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中,在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质,则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样,也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确,精密度高,且测定条件要相同。
实验证明,不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同,这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度,以确定选择哪一种溶剂。
在水和废水监测中的应用,对于一个水系的监测分析和综合评价,一般包括水相(溶液本身)、固相(悬浮物、底质)、生物相(水生生物)。在水质的常规监测中,紫外可见分光光度法占有较大的比重。由于水和废水的成分复杂多变,待测物的浓度和干扰物的浓度差别很大,在具体分析时必须选择好分析方法。
在农产品和食品分析中可用于检测的组分或成分有蛋白质、赖氨酸、葡萄糖、维生素C、硝酸盐、亚硝酸盐、砷、汞等;
在植物生化分析中可用于检测叶绿素、全氮和酶的活力等;
在饲料分析中可用于检测烟酸、棉酚、磷化氢和甲酯等。
1、仪器常见故障发生的原因:
出库的仪器都是经过调试、老化和检验通过的仪器,所以在正常的存储、搬运与使用中不应该有问题的出现,在仪器的使用过程中出现的问题主要原因在于:
1)、存储和使用环境的恶劣导致电器零部件和光学件的损坏
2)、不适当的搬运导致仪器紧锢部件的松动或易损器件的损坏
3)、用户的误操作
4)、灯的使用超过其寿命时间
5)、电器件的老损
6)、用户电网的不稳定
2、仪器常见故障的种类:
1)、联机问题
2)、稳定性问题
3)、自检通不过
4)、其它问题
3、仪器常见故障的分析与解决:(软件不属于标配)
1)、联机问题:
①、重新阅读用户使用说明书中关于联机的部分,按照说明书上的步骤重新做一遍。
②、确认电脑与仪器的USB连接线是否联好。
③、确认电脑中是否有两个或两个以上的本仪器应用软件在工作,电脑是否死机,(电脑注销或重新启动)。
④、确认有没有其它软件占用此串行口(关掉此应用软件)。
⑤、确认仪器已经自检完毕,屏幕上有没有显示“联机字样”(关掉仪器重新启动)。
⑥、确认是否在电脑上插上仪器应用软件的加密狗。
⑦、电脑串行口是否已损坏(重新换台电脑试一下)。
⑧、应用软件是否对。
⑨、与供应商或厂商的技术员。
2)、稳定性问题:
①、紫外区(190nm-339nm)不稳:
A、预热时间未到30分钟,多预热一会儿。
B、波长出错引起的,(选择系统校正,分别做一次暗电流校正和波长校正。注意自检时样品室盖要盖好,样品室中不能放任何东西,四联样品池架停在一个固定的档位上)。
C、检查、计算一下氘灯的寿命是否已到(一个氘灯的寿命约为2000小时)。
D、分别看一下200nm和220nm波长下的稳定性,如果200nm稳定性不好而220nm稳定性是好的,说明是能量问题或光路的问题,有仪器知识基础的可以自己动手检查或微调一下光斑。
E、分别看一下220nm和250nm波长下的稳定性,如果220nm稳定性不好而250nm稳定性是好的,说明是长时间的包装,使包装上的气味进入仪器内部引起的,让仪器摆放一段时间即可。
F、分别看一下250nm和可见区任意波长下的稳定性,如果250nm稳定性不好而可见区是好的,说明是氘灯或氘灯电源 的问题,更换氘灯,或与供应商或厂商的技术人员。
G、紫外区和可见区稳定性都不好是放大板及其供应电源的问题。
H、与供应商或厂商的技术人员。
②、可见区(340nm-1100nm)不稳:
A、预热时间未到30分钟,多预热一点时间。
B、波长出错引起的,(选择系统校正,分别做一次暗电流校正和波长校正。注意自检时样品室盖要盖好,样品室中不能放任何东西,四联架停在一个固定的档位上)。
C、检查、计算一下钨灯的寿命是否已到(一个钨灯的寿命约为2000小时)。
D、分别看一下1000nm和500nm波长下的稳定性,如果1000nm稳定性不好而500nm稳定性是好的,说明是能量问题或光的问题,有基础的自己动手检查或微调一下光斑。
E、紫外区和可见区稳定性都不好,可能是放大板及其供应电源的问题。
F、与供应商或厂商的技术人员。
3)、自检通不过:
我们所说的真正意义上的自检,包括开机时的功能检查和系统应用中的波长校正功能,
本仪器的ROM是掉电可保存的,它可以存储仪器的系统参数,所以开机所做的只是对仪器功能诸如:滤色片定位,切换定位,氘灯、钨灯开关、光电池能量检查和暗电流大小的检查等,在每一步检查不过时,它都会打错号并蜂鸣提示,出现如此情况我们只要检查相应功能的关联器件即可。
仪器很多是由于用户误操作或搬运引起的问题,都可以通过波长校正来解决,因为仪器如果波长都不对了,在去看其他的指标和测试都没有意义了,换句话说如果波长错了便可以引发各种各样的问题。所以碰到诸如:不稳、测出的数据不对、扫描的峰值不对等,都可以先自检一下波长(具体操作方法参照操作方法)。
①、滤色片通不过:
A、电机不转(驱动芯片微机板上的62083坏、微机板上的3号8255坏或电机坏)
B、不能正常定位(光耦坏、光耦线接触性不好或1号8255坏)
②、切换通不过:
A、电机不转(驱动芯片微机板上的62083坏、微机板上的3号8255坏或电机坏)
B、反方向转或碰到开关不停(微动开关坏、微动开关线接触不好或1号8255坏)
③、光电池通不过:
A、供应放大板的+/-15V没有(电源板上7815/7915坏或3芯线接触不好),
B、8325坏、短路或供其5V电压没有(放大板上78L05坏)
C、3040的3脚输出4.08V没有(3040坏)
D、滤色片位置错。
E、3140或OP07坏
F、78E516B坏或放大板到微机板的信号线接触性不好
④、波长校正出错:
A、自检时(开样品室盖或里面放东西)导致波长出错
B、样品室四孔架没有在档位而遮光
C、氘灯不亮(氘灯坏、氘灯电源板坏、氘灯开关坏或其开关信号不对)
D、光学件发霉导致能量低
E、波长电机先反转后正转(光耦坏、其线接触性不好或1号8255坏)
F、滤色片电机失步或其位置信号不对
⑤、暗电流通不过:
A、暗电流过大或过小(用户打开样品室盖子自检)
B、放大板问题(与光电池通不过同)
4)、其它问题:
①、开机没反应:
A、检查外接电源是否正常
B、检查电源线,看是否电源线插头接触不良
C、检查仪器主机保险管是否熔断,如果是则更换保险管。
②、开机仪器在工作,但屏幕不显示或显示不清楚:
A、请检查对比度调节旋钮或打开罩壳调节微机板上的电位器
B、CPU78E516B、液晶或微机板上的1,2号8255坏,或显示接线接触性不好
③、打印机不工作,打印出错:
A、检查仪器打印机连线是否松动。
B、检查系统应用中打印机类型选择是否正确,如果是内置打印机,请选择面板式,如果是外置打印机,请选择平台式。
④、样品检测不稳定:
A、确认仪器是否正常自检。
B、在当前测量状态下,取出比色皿,样品池为空状态,按ZERO,查看吸光度0.000Abs,是否跳动,如果在±0.002之间跳动为正常,如果跳动太大,请确认外部电源是否为稳压电源,确认完成后关闭仪器电源重新自检,确认自检正常。如果样品池为空,按ZERO,查看吸光度0.000Abs跳动是否正常。
C、测量的样品是否挥发性太大,请使用比色皿盖子,如果是苯蒸气等强挥发性气体,请敞开样品池去除干扰气体后测量。
D、确认是否正确使用空白溶液校零。根据相关规定,用来校零的空白溶液的吸光度值
不应该超过0.4Abs,如果超过请检查或更换空白溶液或参比溶液。
⑤、测量样品重复性差:
A、确认样品是否稳定,样品是否有光解等现象;
B、请检查比色皿擦拭方法是否正确,应仔细擦拭、清洗比色皿。
⑥、测量样品吸光度不准确:
A、在系统应用中进行“暗电流校正”,校正完成后重新校正空白溶液,再测量,
B、比色皿配对性不好,请检查比色皿的配对性。