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薄层色谱法的特点和点样时应该注意哪些问题 薄层色谱如何操作

时间:2020-08-06    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
薄层色谱法的特点
1、不需要而精密的气相色谱仪分析仪器,分析天平除外,设置和操作简单。
2、与纸色谱分析法相比,优越于可以使用腐蚀性的显色剂。
3、可选择的流动相和固定相范围比纸色谱法广泛。
4、展开快速,且扩散的作用小,斑点比纸色谱集中,检出灵敏度比较高。技术上多样化,不仅有多中展开方式(例如,分布展开,连续展开,双向展开,浓度梯度展开等)对复杂的混合物进行分离,分析。
5、适用于分离,分析少量样品。
6、与气相色谱法相比,薄层色谱法适用于分离,气相色谱仪分析受热不稳定的难以挥发的样品,这点与液相色谱法及早期的液相柱色谱法相同。
7、薄层色谱法和纸谱法都是手工操作,自动化程度较低,分离效果,和重现性都较差,分离复杂混合物由一定的困难。
纸色谱只用于分离,然后用比色法定量。而气相色谱仪薄层色谱法分离后可直接测量斑点面积定量,或用滴定法、比色法定量。 
薄层色谱法点样时注意哪些问题
用打孔器把滤纸制成直径2毫米的小园片,随后把小园片戳附在小号缝衣针的针尖上,其大头部分固定在软木塞上,用微量注射器吸取酒样和配制的标准溶液,缓慢地点加在小园滤纸片上,边点加边用吹风机以100℃以上的热风把点样吹干。在活化并经过冷却的薄层板上,用缝衣针的大头把硅胶薄层抠掉一小孔,直径略小于2毫米,在小孔中用少许淀粉浆糊,把点加的酒样或标准溶液的滤纸片粘附于小孔上。


  【仪器网 使用手册】展开是薄层色谱法重要的步骤,展开剂与展开方式的选择都会对实验结果造成很大的影响。因此操作人员要根据实验要求与实际情况选择合适的展开剂与展开方式。
 
  展开剂
 
  展开剂的极性增大次序为:石油醚→环己烷→二硫化碳→四氯化碳→二氯乙烯→苯→二氯甲烷→氯仿→乙醚→四氢呋喃→乙酸乙酯→丙酮→丁酮→正丁醇→乙醇→甲醇→水→冰醋酸→吡啶→有机酸。
 
  展开剂的选择标准:选择展开剂时要求展开剂对薄层吸附剂有一定亲和力,能把被分离物从吸附剂表面解析下来,但又不能过强,否则被解析下来的物质不易再吸附。当单一溶剂不能满足要求时,可用多元混合溶剂作展开剂。
 
  展开方式
 
  1.上行展开
 
  点样后的纸或薄层的底边置于盛有展开剂的直立型的多种规格的平底或双槽展开室中,展开剂由纸或薄层下端借毛细管作用上升至前沿。适合含粘合剂的硬板展开,是薄层色谱中常用的展开方式。
 
  2.下行展开
 
  将点样后的滤纸悬放在展开剂槽中,用粗玻棒压纸以固定,展开室底部可放饱和滤纸用的溶剂,展开剂从上而下流动,下行法中展开剂除毛细管作用外还有重力作用,因此展速比上行法相对较快,多用于纸色谱法。
 
  3.双向展开
 
  一般操作是取一块方形的薄板,在角上点样,展开后取出晾干。将薄板转90度,换另一种展开剂再次展开,可取得较好的分离效果。通常用于成分较多、性质比较接近的难分离物质的分离。
 
  4.近水平展开
 
  将适量展开剂倾入长方形的玻璃展开室中,将点样后的薄层板下端浸入展开剂0.5cm,薄层上端垫高使薄层与水平成5°-10°的角度,这样展开剂就由下而上进行展开。这种展开方法适用于不含粘合剂的软板的展开。

摘要:采用薄屠色谱法对复方桔梗止咳片中的桔梗、远志及甘草等进行了定性鉴别。该法可用

于对产品质量的控制。
关键词:复方桔梗止咳片;TLC;鉴别
复方桔梗止咳片是由桔梗、远志(蜜炙)、款冬花(蜜炙)和甘草等四味中药组成,具有镇咳、祛痰之功效,用于治疗伤风咳嗽、咽喉肿痛、急慢性气管炎等。现行质量标准中只有性状一项。为了控制产品质量.本文对桔梗、远志及甘草进行了薄层色谱鉴别研究。
1 仪器与试药
YH140电热恒温干燥箱(广州东方红医疗器械厂);硅胶G(青岛海洋化工厂);桔梗、远志、甘草对照药材、甘草次酸对照品(中国药品生物制品检定所);复方桔梗止咳片(我所抽验样品);阴性样品(按处方工艺制得缺味样品);所用化学试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果
2.1 桔梗与甘草的鉴别
2.1.1 样品溶液的制备 取本品10粒.去糖衣.研碎,取细粉1.5g,加盐酸1ml与氯仿20m1.加热回流1h.放冷,分取氯仿层,滤过.蒸干.残渣加乙醇lml溶解,即得。
2.1.2 对照药材溶液的制备 分别取桔梗、甘草对照药材各0.1g,按样品溶液制备方法制成对照药材溶液。
2.1.3 甘草次酸对照品溶液的制备 取甘草次酸对照品加乙醇制成2mg/ml的溶液。
2.1.4 阴性对照溶液的制备 分别取桔梗、甘草外的处方其它药材,按处方工艺分别制备成缺桔梗、缺甘草的阴性样品,再按样品溶液制备方法制成阴性对照溶液:
2.1.5 薄层色谱鉴别结果吸取上述溶液各5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(30~60℃) 醋酸乙酯-冰醋酸(25:7:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以8%香草醛乙醇溶液与硫酸溶液(7~10)的混合液(0.5:5),在105℃ 加热至斑点显色清晰。样品溶液色谱中,在与对照药材溶液、对照品溶液相应的位置上显相同颜色的斑点,阴性对照溶液则无。
2 2 远志的鉴别
2 2.1 样品溶液的制备取本品10片,去糖衣,研碎,取细粉1.5g,加乙醇20ml,加热回流20min,滤过,滤液浓缩至约10ml,放冷,加入3倍量的乙醚,放置使沉淀完全,倾去上清液,加10%盐酸溶液10ml,加热回流30min,放冷,滤过,沉淀物用甲醇5ml溶解,即得。
2.2.2 对照药材溶液的制备 取远志对照药材0.5g,按样品溶液制备方法制成对照药材溶液。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 取远志外的处方其它药材,按处方工艺制备成阴性样品,再按样品溶液制备方法制成缺远志的阴性对照溶液。
2.2.4 薄层色谱鉴别结果吸取上述溶液各10μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-丙酮-正己烷-醋酸(8:4:0.2:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%香草醛硫酸溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。样品溶液色谱中,在与对照药材溶液相应的位置上显相同的紫色斑点,阴性对照溶液则无。
3 讨论
为了加强薄层鉴别的专属性,曾考虑采用药材及其化学成分单体,但目前尚未找到桔梗、远志药材成分的单体,所以以药材作对照。本文建立的色谱条件,可在同一薄层板上鉴别桔梗和甘草,结果令人满意。
参考文献
1卫生部部颁标准中药成方制剂(第四册) l991:121
2卫生部部颁标准中药成方制剂(第十四册).1997:140~141

 



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