分光光度计的使用步骤主要有哪些?
以下相关工程师做如下介绍：
1.把分光光度计电源线连接好，仪器的电源具备接地功能;
2.接通电源后，按动开机开关，然后让仪器预热至少20分钟；
仪器会自动校正，然后显示546.0nm 0.000A说明自检结束，就可以开始测试;
3.使用“方式”键测试的方式，再根据自己要测量的结果选透光率、吸光度、和浓度的测试;
4.要对波长进行分析，选择按键6，然后按提示依次进行;
5.把样品溶液和要测定的溶液各自倒入比色皿中后；
然后打开样品盖，把盛着溶液的比色皿插入另一个比色皿中，最后盖好样品盖;
6.把参比的溶液拉到光路中按住“OABS/100%T”键；
这时的显示器会显示出BLANKING,，直到最后显示出“100%T”或者是“0.000A”为止;
7.最后仪器显示出“100%T”或者是“0.000A”即可结束测试。
这时被测样品的透光度、吸光度等参数就可直接读出;
8.分光光度计使用完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。
分光光度计的使用注意事项：
1、分光光度计应放在干燥的房间内，使用时放置在坚固平稳的工作台上，室内照明不宜太强。
热天时不能用电扇直接向仪器吹风，防止灯泡灯丝发亮不稳定;
2、分光光度计使用前，使用者应该首先了解分光光度计的结构和工作原理，以及各个操纵旋钮之功能。
在未按通电源之前，应该对仪器的安全性能进行检查，电源接线应牢固；
通电也要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再按通电源开关。
3、在分光光度计尚未接通电源时，电表指针必须于“0”刻线上；
若不是这种情况，则可以用电表上的校正螺丝进行调节。
除了核酸浓度，分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，如A260/A280的比值，用于评估样品的纯度，因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子。纯样品，A320一般是0。
蛋白质的直接定量(UV法)
这种方法是在280nm波长，直接测试蛋白。选择Warburg公式，光度计可以直接显示出样品的浓度，或者是选择相应的换算方法，将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单，先测试空白液，然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质，一般要消除320nm的“背景”信息，设定此功能“开”。与测试核酸类似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，较佳的线性范围在1.0-1.5之间。实验中选择Warburg公式显示样品浓度时，发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上，只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%，表明结果非常稳定。漂移的原因是因为Warburg公式吸光值换算成浓度，乘以一定的系数，只要吸光值有少许改变，浓度就会被放大，从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。紫外直接定量法相对于比色法来说，速度快，操作简单;但是容易受到平行物质的干扰，如DNA的干扰;另外敏感度低，要求蛋白的浓度较高。
比色法蛋白质定量
蛋白质通常是多种蛋白质的混合物，比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸(如酪氨酸，丝氨酸)与外加的显色基团或者染料反应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。
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