原代培养的细胞会不可避免地存留少量异质细胞一同生长.为了后续实验结果的针对性和准确性,一般都需要对培养物进行纯化。纯化神经元的方法有很多种,简便及常用的是采用有丝分裂抑制剂阿糖胞苷来抑制异质细胞的存活和生长。神经元的分化增殖完成于胚胎期,大部分神经元在出生后即为分裂后细胞,但其他细胞则仍然不断地进行分裂增殖,使用有丝分裂抑制剂后,非神经元的细胞生长会受到抑制及淘汰,神经元由此得到纯化实验材料:Hanks液,DMEM培养基10ml,有刻度吸管两只,弯头吸管两只,无刻度吸管一只,新生乳鼠(24小时)0.05%胰酶,1%双抗,10%胎牛血清,培养皿,小烧杯,空的离心管,镊子,剪刀,酒精灯,酒精棉,实验前准备工作:肥皂洗手,新吉尔灭擦手,开通风柜,将吸管从套筒中取出放入各自对应的试管内,将橡皮塞安装到各自吸管上,酒精灯分别迅速灼烧,1配液Hanks液近40ml加1%双抗1ml,加完双抗的小吸管留作计数,在DMEM培养基中加10%胎牛血清(已配好,全部加入),从离心管取一滴碳酸氢钠调节pH值至溶液呈紫色,一离心管0.05%胰酶,
取材。乳鼠新生24小时。3,洗涤剪碎,在培养皿中加入少许Hanks液洗涤,将乳鼠头部用酒精棉擦拭消毒,在乳鼠头部位置剪一个工字型切口,将皮肤颅骨沿着切口依次剪开剥离,取出大脑组织,并去除乳鼠的血管脑膜,用弯头吸管将Hanks液与剥离干净的脑组织移走到另一个干净的培养皿中,用弯头吸管洗走洗液,弯头吸管将含有脑组织的Hanks移入到小烧杯中剪碎,每个组织块近似一立方毫米,静置后洗走上面的Hanks液,(吸取Hanks液时勿将下面的组织块洗走),同样方法再用Hanks液洗涤一次4.酶解,加一离心管0.05%胰酶,将上述小烧杯中的组织液移入空置的离心管中,37摄氏度水浴10分钟,观察组织块是否变小,静置2分钟,使组织沉淀下来,弃掉上请胰酶后,加DMEM培养基(全部倒入)来中和胰酶,吹散组织液5.离心1200转每分钟,离心5分钟,弃掉上清液,沉淀后加Hanks液吹散重悬组织液,用同样的转速和时间在离心一次,加完全培养基3-4mL吹散,静置1分钟,以便消化大块组织6.计数,取0.1ml离心后的细胞液加入苔盘蓝染色,加样抢加0.1微升与计数板计数,同时剩余细胞液加入培养瓶中进行培养接种,标注好组别和时间,培养细胞的名称37摄氏度,二氧化碳培养箱中,下周实验课观察细胞培养情况。
恒温恒湿培养箱可广泛用于药物/纺织/食品加工等无菌试验,稳定性检查以及工业产品的原料性能,产品包装寿命等测试。具有精确的温度和湿度控制系统,它为产业研究、生物技术测试提供所需要的各种环境模拟条件。设备在后期使用时,要做好日常的维护保养工作,下面给大家讲讲: 1、检查超温保护器本机运转时,超温保护之设定最高值加20℃~30℃。试验箱内之温度升至超温保护之设定点时,加热器之供电即停止,”OVERHEAT”超温警示灯亮但风扇仍运转,若长时间运转及无人看管,运转前请务必确实检查超温保护器,是否设定妥当?(湿球超温保护器之设定为120℃)。 2、冷凝器灰尘之清除冷凝器应定期每月保养,利用真空吸尘器将冷凝器散热网片上附着之灰尘吸除或利用高压空气喷除灰尘。 3、箱体内外部的清洁与保养机器在操作前应先将内部杂质﹝物﹞清除。配电室内每年至少清洁一次以上,清洁时可利用吸尘器将室内灰尘吸除即可。箱体外部每年亦须清洗一次以上,清洗时先用肥皂水擦拭即可。 4、湿球水位之检查与调整积水筒水位不可过高,使水溢出积水筒或过低使湿球测试布吸水不正常,影响湿球的准确性?水位大约保持六分满即可。积水筒水位之调整,可调整积水盒的高低。 5、湿球测试布之更换当测试布表面不干净或变硬,或于做完温度控制后,继续做温湿球度控制前都必须更换测试布。测试布约三个月更换一次,更换时应用清洁布擦拭测温体,更换新测试布时应先清洗干净。 6、加湿器之检查与保养加湿器内之储水应每月更换一次,确保水质清洁,加湿水盘应每一个月清洗一次,确保水流顺畅。
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