实时荧光定量PCR检测服务所使用的荧光化学材料可分为两大类,即荧光染料和荧光探针。荧光染料以SYBR GreenⅠ为主要代表,是非特异性荧光化学材料。荧光探针包括TaqMan、分子信标、荧光标记引物、杂交探针等,属于特异性荧光材料。测吸光值一定要使用平底的培养板。要注意材质, 标示Tissue Culture (TC) Treated是养细胞用的。U型或V型板,一般在某些特殊要求时才使用。如在免疫学方面,当做两种不同淋巴细胞混合培养时,需要二者相互接触刺激,这时一般会选用U型板,因为细胞会由于重力的作用而聚集在很小的范围内内。由于被释放的荧光基团数目和PCR产物数量是相对应关系,且荧光强度同被释放的荧光基团的数目也是正比关系,因此该可对模板进行准确定量。TaqMan探针特异性好、准确性高、假阳性低、重复性比较好。但是需要设计特异性的探针,因此成本较高。
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胰蛋白酶Trypsin (Parenzyme) 为蛋白酶的一种,是从牛、羊、猪的胰脏提取的一种丝氨酸蛋白水解酶。在脊椎动物中,作为消化酶而起作用。在胰脏是胰蛋白酶的前体胰蛋白酶原被合成后,作为胰液的成分而分泌,受肠激酶,或胰蛋白酶的限制分解成为活化胰蛋白酶,是肽链内切酶,它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。它不仅起消化酶的作用,而且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其它酶的前体,起活化作用。是特异性zui强的蛋白酶,在决定蛋白质的氨基酸排列中,它成为不可缺少的工具。上用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤、瘘管等所产生的局部水肿、血肿及脓肿等。平底和圆底(U型和V型)培养板的区别和选择不同形状的培养板有不同用途。培养细胞,通常是选用平底的,这样便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致。因此做MTT等实验时,无论是贴壁和悬浮细胞,一般选用平底板。
Lysozyme (溶菌酶)又称胞壁质酶(muramidase)或N-胞壁质聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase),是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。主要通过细胞壁中的N-胞壁酸和N-葡糖之间的β-1,4糖苷键,使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,细胞壁破裂内容物逸出而使溶解。溶菌酶还可与带负电荷的蛋白直接结合,与DNA、RNA、脱辅基蛋白形成复盐,使失活。因此,该酶具有、、抗等作用。
但在PCR扩增中,模板变性后低温退火,引物与探针同时与模板结合,在引物的介导下,沿模板向前延伸至探针结合处,发生链的置换,Taq DNA聚合酶的5′→3′外切酶活性将探针5′端连接的荧光发射基团从探针上切割下来,游离于反应体系中,从而脱离3端荧光淬灭基团的屏蔽,接受光刺激发出荧光信号。圆底培养板还会用于同位素掺入的实验,需要用细胞收集仪收集细胞的培养,如混合淋巴细胞培养等。V型板常用做细胞杀伤、免疫学血凝集实验。细胞杀伤这种实验也可用U型板替代(加入细胞后,低速离心)。Terasaki板和普通细胞培养板的区别Terasaki plate主要是用于晶体学研究,产品设计便于对晶体的观察与结构分析。分子信标是一种呈发夹结构的茎环状双标记寡核苷酸探针,环部与靶DNA序列互补,为15~35 bp;茎部是由互相配对的碱基组成,但与靶DNA无序列同源性,约8 bp。在探针的5′端和3′端分别标记荧光发射基团和荧光淬灭基团。当溶液中的模板与分子信标结合配对时,分子信标的构象改变成链状使得荧光发射基团与淬灭基团分开,当荧光基团被激发时,就发出荧光信号。
1.人体工学设计,轻盈光滑的柱塞动作柔软手感握柄均适用于左手和右手使用者。
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