1.离心机应放置在水平坚固的地板或平台上,并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器震动。
2.打开电源开关,按要求装上所需的转头,将预先以托盘天平平衡好的样品放置于转头样品架上(离心筒须与样品同时平衡),关闭机盖。
3.按功能选择键,设置各项要求:温度、速度、时间、加速度及减速度,带电脑控制的机器还需按储存键,以便记忆输入的各项信息。
5.待离心机完全停止转动后打开机盖,取出离心样品,用柔软干净的布擦净转头和机腔内壁,待离心机腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。
1.机体应始终处于水平位置,外接电源系统的电压要匹配,并要求有良好的接地线.开机前应检查转头安装是否牢固,机腔有无异物掉入。
4.挥发性或腐蚀性液体离心时,应使用带盖的离心管,并确保液体不外漏,以免腐蚀机腔或造成事故。
离心机是借离心力分离液相非均一体系的设备。根据物质的沉降系数、质量、密度等的不同,应用强大的离心力使物质分离、浓缩和提纯的方法称为离心。一般说, 离心机转速在 20 000r/min 以上的称为超速离心。离心技术,特别是超速离心技术是分子生物学、生物化学研究和工业生产中不可缺少的手段。
1924 年 T.Svedberg 和 Rinde 研制出世界上第一台涡轮超速离心机以来,发展非常迅速,现在已广泛地应用到科学研究和生产的各个领域。现在离心机转头最高转速已达 100000 r/min ,最大离心力达 700 000 g 。
离心机作为一种手段,具有许多优点。例如,超速离心可在低温下操作,保护了生物大分子的活性。制备型的离心机负载量大,一次可分离提纯几克样品,比层析、电泳上的样品量大得多。分析离心机不仅可测物质的分子量,还可检验物质的纯度、构象、沉降系数等。因此离心技术在生物学研究中占有重要的地位,是分离、纯化细胞、病毒、蛋白、核酸和酶的较为方便比较有效的工具。
当含有细小颗粒的悬浮液静置不动时,由于重力场的作用使得悬浮的颗粒逐渐下沉。粒子越重,下沉越快,反之密度比液体小的粒子就会上浮。微粒在重力场下移动的速度与微粒的大小、形态和密度有关,并且又与重力场的强度及液体的粘度有关。象红血球大小的颗粒,直径为数微米,就可以在通常重力作用下观察到它们的
此外,物质在介质中沉降时还伴随有扩散现象。扩散是无条件的绝对的。扩散与物质的质量成反比,颗粒越小扩散越严重。而沉降是相对的,有条件的,要受到外力 才能运动。沉降与物体重量成正比,颗粒越大沉降越快。对小于几微米的微粒如病毒或蛋白质等,它们在溶液中成胶体或半胶体状态,仅仅利用重力是不可能观察到沉降过程的。因为颗粒越小沉降越慢,而扩散现象则越严重。所以需要利用离心机产生强大的离心力,才能迫使这些微粒克服扩散产生沉降运动。
离心就是利用离心机转子高速旋转产生的强大的离心力,加快液体中颗粒的沉降速度,把样品中不同沉降系数和浮力密度的物质分离开。离心力 (F) 的大小取决于离心转头的角速度 ( ω , r/min) 和物质颗粒距离心轴的距离 (r , cm) 。它们的关系是: F = ω 2R
为方便起见, F 常用相对离心力也就是地心引力的倍数表示。即把 F 值除以重力加速度 g ( 约等于9.8m/s2.) 得到离心力是重力的多少倍,称作多少个 g 。例如离心机转头平均半径是 6cm ,当转速是 60 000
r/min 时,离心力是 240 000 × g ,表示此时作用在被离心物质上的离心力是日常地心引力的 24 万倍。 因此,转速 r/min 和离心力 g 值之间并不是成正比关系,还和半径有关。同样的转速,半径大一倍,离心力 (g 值 ) 也大一倍。转速 (r/min) 和离心力 (g 值 ) 之间的关系可用下式换算:
用离心方法分离生物大分子和亚细胞物质的基本原理是根据它们在液体介质中或者沉降速度不同而形成不同的区带,或者它们的密度 不同而停留在液体介质中不同的位置而把它们一一分开。前者是沉降速度法,应用该法时液体介质的最大密度要小于样品中最小颗粒的密度,离心时选用高转速和短时间;后者是沉降平衡法,应用该法时液体介质的最大密度要大于样品中最小颗粒的密度,离心时选用较低转速和较长时间。实际操作有几种形式:
1. 差速离心这种方法是选择不同转速的离心,分别分离各个不同组分。例如先用低速沉降大颗粒和上清液,在高速离心上清沉降中等颗粒,最后超速离心上清沉降小颗粒。采用逐级提高离心力分离上情液的方法,把不同大小的颗粒分开。
这种方法比较简单,方便。分离的组份沉到管底,因此可以迅速浓缩所要的组份,减少体积。但回收率和纯度是有矛盾的,要提高回收率,势必提高转速或延长离心时间,这样大小相近的颗粒也会沉到管底。因此该法多用于粗提纯或初步浓缩样品。
2. 速度区带 ( 或速度梯度 ) 离心 本法是将样品放在一个连续的密度梯度液体上,通过离心,大颗粒沉降快,小颗粒沉降慢。经过一段时间,相同的颗粒就在同一深度形成一条带子,因此把各种组份分开来。它适用于分离密度相同、而大小不同的物质,如不同的蛋白质组份密度都差不多,但分子量不一样,用本法很容易将其分开。但对密度不同、大小类似的物质则不易分离。蔗糖梯度是一种常用的介质。用不同浓度的蔗糖溶液 (5%-60%) 配成梯度,用于梯度离心。再分别进行收集处于不同区带里的各个组份。
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离心机有一个绕本身轴线高速旋转的部件,称为转子,通常由电动机驱动。
悬浮液(或乳浊液)加入转子后,被迅速带动与转子同速旋转,在离心力作用下各组分分离,并分别排出。通常,转鼓转速越高,分离效果也越好。
离心机使用和操作注意事项:
1.离心机运转前应先切断电源,并可以用手试转动转子,看有无咬煞情况;
2.检查其他部位有无松动及不正常情况;
3.使用各种离心机时,必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物,平衡时重量之差不得超过各个离心机说明书上所规定的范围;
每个离心机不同的转头有各自的允许差值,转头中绝对不能装载单数的管子;
当转头只是部分装载时,管子必须互相对称地放在转头中,以便使负载均匀地分布在转头的周围。
4.装载溶液时,要根据各种离心机的具体操作说明进行,根据待离心液体的性质及体积选用适合的离心管,有的离心管无盖,液体不得装得过多;
以防离心时甩出,造成转头不平衡、生锈或被腐蚀,而制备性超速离心机的离心管,则常常要求必须将液体装满,以免离心时塑料离心管的上部凹陷变形。
5.每次使用后,必须仔细检查转头,及时清洗、擦干,转头是离心机中须重点保护的部件,搬动时要小心,不能碰撞,避免造成伤痕,转头长时间不用时,要涂上一层上光腊保护,严禁使用显著变形、损伤或老化的离心管。
6.若要在低于室温的温度下离心时。转头在使用前应放置在冰箱或置于离心机的转头室内预冷。
7.离心过程中不得随意离开,应随时观察离心机上的仪表是否正常工作,如有异常的声音应立即停机检查,及时排除故障。
8.每个转头各有其最高允许转速和使用累积限时,使用转头时要查阅说明书,不得过速使用。
每一转头都要有一份使用档案,记录累积的使用时间,若超过了该转头的最高使用限时,则须按规定降速使用。
9.严禁机器超速运转,以免影响机器使用寿命;
9.机器开动后,若有异常情况必须停车检查,必要时需予以拆洗修理;
10.离心机工作时是高速运转,不要移动机器,以防意外;
11.为确保离心机正常运转,重要部件请按时保养。同时查看轴承处运转润滑情况,有无磨损现象;
12.机器使用完毕,应作好清洁工作,保持机器整洁;
13.另外严格按照设备要求、规定操作,非防爆型离心机切不可用于易燃、易爆场合。
离心机电源出现问题应该如何处理:
以下原因大部分均系不正确操作所致,在找出原因后,正确操作即可消除不正常现象。
在工作过程中,如出现任何异常现象均应立即停机,不得强行运转,以免产生不必要的损失。
1、电源不通是导致冷冻离心机的冷冻机启动及制冷效果差的原因之一,与电机不转的故障相同,应分别检查电源及保险丝。
2、电压过低,安全装置故障也可使冷冻机不能启动,电压过低可能是电网电压低;
配电板配线过多;电源线过长(理想长度为3米)等。电源线容量不够,不仅使电压降低,还会造成意外事故。
当电源电压降到180—190VJ时,冷冻机不能启动,影响制冷效果。
3、通风性能不好,如仪器安装在日光直射或通风不良处,散热器效果差,或散热器盖满灰尘,也中会影响制冷效果。
4、离心管重量不平衡,放置不对称;转子孔内有异物,使负荷不平衡;转轴上端固定螺帽松动,转轴磨擦或弯曲;
电机转子不在磁场中心会产生噪音;转子本身损伤等都可导致机体震动剧烈、响声异常。