1、生物显微镜的安放应选择干燥清洁的房间,以避免光学部件发霉、金属部分生锈以及粘满灰尘。显微镜使用完毕后,即放回箱(柜)内,或用玻璃罩、塑料套罩住,并放入干操剂。
2、不要自行拆卸生物显微镜各部件;镜筒要插上接目镜或益上镣苗盖,避免灰尘从镜筒上部进入;透镜表面不要用手指碰触或拭擦,如有灰尘,先用柔软毛笔轻轻拂去,再用柔软的清洁细布拭撩,也可用擦镜纸蘸少许二甲苯或石油迷试擦,但注意不要在透镜表面划出条纹。如镜片有轻度长霉,用擦绕纸擦不去时,可用棉签蘸少许70%乙醇与30%乙迷混合液轻轻拭撩。
3、生物显微镜不可与腐蚀性酸类、减类或挥发性强的化学药品放在一起,以免被腐蚀,缩短使用年限。原则上,当观察含液体的标本时,一般都要盖上盖玻片;若液体中含有酸、碱等腐蚀性化学物质时,应把盖玻片的四周用石蜡或凡士林封住,然后观察。但由于进行中药显微鉴定时,经常要用这一类试剂,不可能都封固,因此要特别小心,防止液体流到载物台上,吏不要沾到物镜上。
4、生物显微镜不应在直射阳光下暴晒,也不要放在靠近炉子或暖气的地方,以避免过剧的冷热变化引起透镜和机件的脱胶、变形或损坏。
5、清洁接生物显微镜物镜只限于外表面。接物面被药品污染后即用撩镜纸蘸少许擦镜液拭擦(不要用乙醇);若背面须清洁时,可用柔软毛笔拂拭,或用皮吸头吸去灰尘。
6、转动粗细调比铝调焦时,动作要缓慢,不要压碎盖被片,以防接物镜和集光器受控击而损坏。
7、使用油镜后,须将镜头上的香柏油拭探干净(可用擦镜纸蘸少许二甲苯拭擦,但注怠二甲苯不能渗入镜头内部,否则二甲苯溶解透镜之间的粘合剂,可使镜片脱落)。
8、反光镜镜面要保护清洁,不要使水、二甲苯或香柏油透入,以免反光镜的水银脱落。
9、加机械部分不灵活,可用细绸布蘸二甲苯少钧:拭去锈和油腻(不得用乙醇,因为这些溶剂会侵蚀油漆),再用少许液体石服润滑;旋扭过紧不要强行扭动,以免损坏。
10、有时在生物显微镜的视野中发现有污点或异物,可先转动目镜,如果这些污点跟着旋转,则可确定污点是在目镜上;否则,可移动标本片,如污点跟着移动,则污点是在标本片上。如果两者都不是,则污点是在物镜上,可先捡食物镜的前镜头,然后检查后镜头。根据不问情况进行清洁处理。
有时视野的一部分不清晰,这可能是物镜或目镜的前透镜表面有指印或灰尘,也可能是标本片做得不好或显微镜用法不当,如照明系统末调好等原因,应查明情况,分别解决。
11、生物显微镜用毕后,应将各部分擦拭干净,格接物镜转成八字形,然后将镜筒和集光器下降固定,再将反光镜的镜面置垂直的位置。
激光共聚焦显微镜是在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置,利用计算机进行图像处理,把光学成像的分辨率提高了30%--40%;
使用紫外或可见光激发荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,在亚细胞水平上观察诸如Ca2+ 、PH值,膜电位等生理信号及细胞形态的变化;
成为形态学,分子生物学,神经科学,药理学,遗传学等领域中新一代强有力的研究工具。
激光共聚焦成像系统能够用于观察各种染色、非染色和荧光标记的组织和细胞等,观察研究组织切片,细胞活体的生长发育特征,研究测定细胞内物质运输和能量转换。
能够进行活体细胞中离子和PH值变化研究(RATIO),神经递质研究,微分干涉及荧光的断层扫描,多重荧光的断层扫描及重叠;
荧光光谱分析荧光各项指标定量分析荧光样品的时间延迟扫描及动态构件组织与细胞的三维动态结构构件,荧光共振能量的转移的分析;
荧光原位杂交研究(FISH),细胞骨架研究,基因定位研究,原位实时PCR产物分析,荧光漂白恢复研究(FRAP);
胞间通讯研究,蛋白质间研究,膜电位与膜流动性等研究,完成图像分析和三维重建等分析。
基本原理
传统的光学显微镜使用的是场光源,标本上每一点的图像都会受到邻近点的衍射或散射光的干扰;
激光共聚焦显微镜利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面的每一点扫描,标本上的被照射点;
在探测针孔处成像,由探测针孔后的光点倍增管(PMT)或冷电耦器件(cCCD)逐点或逐线接收,迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。
照明针孔与探测针孔相对于物镜焦平面是共轭的,焦平面上的点同时聚焦于照明针孔和发射针孔,焦平面以外的点不会在探测针孔处成像;
这样得到的共聚焦图像是标本的光学横断面,克服了普通显微镜图像模糊的缺点。
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