影响紫外可见分光光度计的因素 光度计如何操作

　　
紫外可见分光光度计基本结构由光源、单色器、样品池、检测器和放大显示系统等五部分组成。光源提供入射光，单色器的作用是将来自光源的复合光分解为单色光并分离出所需波段光束。吸收池用来盛放被测溶液，检测器作用是把光信号转换为电信号,信号显示系统是把放大的信号以适当的方式显示或记录下来。
影响紫外可见分光光度计的因素有哪些? ①由于 单色器的类型和质量不同造成的单色性不纯，
②由仪器中光学机械零件的反射和散射以及由仪器的光学系统设计制作缺陷引起的杂散光，
③吸收池的质量,
④电压、检测器负高压波动,造成光源光强波动和检测器噪声增大，⑤其它如吸光度读数刻度误差、仪器安装环境(如振动、温度变化)、化学因素(如荧光、溶剂效应等)等因素的影响。
 

紫外可见分光光度计是一类很重要的分析仪器，无论在物理学、化学、生物学、医学、材料学、环境科学等科学研究领域，还是在化工、医药、环境检测、冶金等现代生产与管理部门，紫外可见分光光度计都有广泛而重要的应用。 1、检定物质根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是大吸收波长λ max和摩尔吸收系数ε，是检定物质的常用物理参数。 2、与标准物及标准图谱对照将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。 3、比较大吸收波长吸收系数的一致性由于紫外吸收光谱只含有2～3个较宽的吸收带，而紫外光谱主要是分子内的发色团在紫外区产生的吸收，与分子和其它部分关系不大。具有相同发色团的不同分子结构，在较大分子中不影响发色团的紫外吸收光谱，不同的分子结构有可能有相同的紫外吸收光谱，但它们的吸收系数是有差别的。如果分析样品和标准样品的吸收波长相同，吸收系数也相同，则可认为分析样品与标准样品为同一物质。 4、反应动力学研究借助于分光光度法可以得出一些化学反应速度常数，并从两个或两个以上温度条件下得到的速度数据，得出反应活化能。 5、纯度检验紫外吸收光谱能测定化合物中含有微量的具有紫外吸收的杂质。如果化合物的紫外可见光区没有明显的吸收峰，而它的杂质在紫外区内有较强的吸收峰，就可以检测出化合物中的杂质。 6、氢键强度的测定不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。 7、络合物组成及稳定常数的测定金属离子常与有机物形成络合物，多数络合物在紫外可见区是有吸收的，我们可以利用分光光度法来研究其组成。
 
　　分光光度计是利用物质对光的选择性吸收进行物质的定性或定量分析的仪器，在各行各业得到了广泛应用，主要用于物质纯度检查、定量分析、物质结构鉴别等。可测量结果总会出现可接受或不可接受的误差，误差来源于测量过程的各个方面，我认为主要来源于仪器本身性能和测量条件的选择两个方面。
　　
　　1仪器本身性能带来的误差
　　
　　1.1复色光对比耳定律的偏离
　　
　　比耳定律成立的前提条件是人射光是单色光，但是精度再高的仪器，即使是双单色器的分光光度计，也只能获得近乎单色的光，无法获得纯单色光，它仍然含有狭窄光通带，具有复色光的性质。而复色光会导致比耳定律的正或负偏离。固定狭缝的紫外分光光度计光谱带宽一般为1nm或2nm，可调狭缝的可以做到0.Inm;可见分光光度计带宽6nm、snm，甚至十几纳米。光谱带宽应该是越小越好，但是随着光谱分辨率的提高，仪器的灵敏度降低，所以选择仪器时要综合考虑各种条件的影响。当溶液浓度较小且单色光较纯时，可近似认为符合比耳定律。
　　
　　1.2杂散光的影响
　　
　　杂散光是指进人检测器的处于待测波长光谱带宽范围外的其他波长组分，它是光谱测量中误差的主要来源。产生原因有:分光光度计的色散元件、反射镜、透镜及单色器内壁灰尘等。在分光光度计工作波段边缘波长处，由于单色器透光率、光源辐射强度、检测器灵敏度都较低，杂散光的影响更为显著。杂散光限制仪器的分析上限可引起严重的测量误差，实际工作中，在定量分析时，一般在吸收峰或其附近处测量样品吸光度，如果在分析波长处含有杂散光，这时样品的透光率较小，而杂散光大部分透过，使测量吸光度低于真实吸光度。
　　
　　1.3仪器噪声对测t的影响
　　
　　仪器噪声也是仪器的一个重要指标，它表征仪器做稀溶液的能力。是叠加在待测量的分析信号中的不需要的信号，扫描100%T和0%T线，可观察到分光光度计的噪声水平，如果仪器噪声较大，会掩盖较小的测量信号，一般用噪音的二倍来表示仪器的灵敏度。
　　
　　1.4波长和吸光度准确度
　　
　　样品的每一个值都是在一定的波长下测得的，如果波长误差很大，测出的值肯定不准。吸光度准确度也是用户对仪器的直接要求，更应引起足够的重视。国家计量检定规程规定双光束紫外可见分光光度计透射比准确度为A级士0.6%,B级土1.0%。
　　
　　2测量条件的选择
　　
　　2.1参比溶液和溶荆的选择
　　
　　分光光度计的测量实际上是以通过参比池的光强度作为人射光强度来测定试样的吸光度，先调节仪器使透过参比池溶液的吸光度为零，然后让同一束光通过样品，使得吸光度比较真实地反映待测物质的浓度，所以参比溶液的选择非常重要。如果仅有待测物质与显色剂的反应产物有吸收，可用纯溶剂或蒸馏水作参比溶液。如果显色剂有颜色，并在测定波长下有吸收，则用显色剂溶液作参比溶液，所加人显色剂及其它试剂的量，与试样中的加入量应一致。如果样品中其它组分本身的颜色对测定有干扰，而所用显色剂没颜色，则用不加显色剂的样品溶液作参比液。
　　
　　正确选择合适的溶剂，对提高分析的准确度起重要作用。为减小溶剂中杂质的影响，应选择高纯度的溶剂;溶剂应不与待测物质发生化学反应;待测物在溶剂中要有一定的溶解度;在测定的波长范围内，溶剂本身没有吸收，注意常用溶剂的zui短可用波长;当用挥发性大的溶剂时，测量过程中吸收池应加盖。
　　
　　2.2测试波长的选择
　　
　　当用分光光度计对溶液进行测定时，首先需要选择合适的测量波长。选择的依据是该被测溶液的吸收曲线。在一般情况下，我们总是选择zui大吸收波长作为测量波长，这样可以提高灵敏度。而在有些情况下zui大吸收峰很尖锐、吸收过大或附近有干扰存在，就不能选zui大吸收波长，而必须在保证有一定灵敏度的情况下，选择吸收曲线中的其它波长进行测定（曲线较平坦处对应的波长），以消除干扰。绘制吸收曲线是正确选择波长的有效手段和方法。
　　
　　2.3吸光度范围的选择
　　
　　试样在不同吸光度时，浓度的相对误差不同，一般选择A二0.2一0.8之间，浓度相对误差较小，可以通过改变吸收池厚度、检测波长或待测溶液浓度，使吸光度读数在适宜范围内。
　　
　　2.4狭缝宽度的选择
　　
　　狭缝宽度不仅影响光谱的纯度，也影响吸光度值，在定量分析时，为了得到足够的测量信号，应采用较大狭缝。在定性分析时，为了提高分辨率，应采用较小狭缝，以获得精细的光谱结构。
　　
　　2.5吸收池的选择和使用
　　
　　吸收池的规格应根据被测溶液颜色深浅来确定，一般是被测溶液颜色深时选光程短的，颜色浅时选光程长的，同一实验使用同一规格同一套吸收池。在定量测量之前需要对吸收池作校正和配对工作，吸收池不匹配时，对测量产生误差，吸收池方向不同，透光率亦有差异，使用时应注意方向。比色皿毛玻璃一面的上端有一个箭头，应与光路保持一致。另外，使用时，不要把溶液注得太满，以防在推动比色皿架时溶液溢出皿外。如透光壁外有溶液存在，要擦干再测，否则将产生误差。
　　
　　2.6温度的选定
　　
　　温度对溶液颜色的深浅和吸光度都有影响，温度升高，紫外一可见光谱吸收向短波方向移动。故在绘制标准曲线和测定样品时，应保持温度一致，通常在室温条件下进行。
　　
　　由于分光光度计引起的测量总误差除来自仪器自身性能、测量条件外，还来自于分析过程的各个步骤，如试样处理、分离富集等，可能由于化学操作引起待测组分的损失和杂质的引人。所以出现不可接受的测量误差时要从多方面分析。
　　
　　仪器的正确使用和保养也很重要，我们应该做到以下几点:坚持标准溶液现用现配，不使用过期溶液;比色皿应保持清洁、干燥，禁止用硬物碰擦透明表面;防止仪器振动，影响测量稳定性;在开机状态，不测量时，应打开样品池门，延长光电传感器寿命;样品集中测量，避免开机次数，延长光源寿命;一旦停机，则应待灯冷却后再重新启动，并预热15min左右再使用;要经常更换仪器的干燥剂，防止光学元件和光电传感器受潮生霉;仪器搬动或更换重要部件后，要重新进行性能确认，以保证测量结果的准确。

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