替米考星含量测定高效液相色谱法
文摘：
建立了替米考星含量测定的HPLC方法，同事测定了复方替米考星颗粒中替米考星、黄安二甲氧嘧啶及甲氧苄啶的含量。采用Vertex C18色谱柱（5μm，4．6mm×250mm），
流动相为磷酸二丁胺缓冲液+乙腈+四氢呋喃+水（25:115:55:805），流速1．0mL/min，检测波长280mn。出峰顺序为甲氧苄啶、磺胺二甲氧嘧啶、替米考星反式结构、替米考星顺式结构，理论塔板数分别为7963、15714、3282、8701。两峰之间的分离度分别为24 29、3 92、2 91；拖尾因子分别为0.92、0.90、0.97、0.94。替米考星、磺胺二甲氧嘧啶、甲氧嘧啶的浓度线性范围分别是6.25~125ug/ml（RE²=0.996），3.125~62.5ug/ml（R²=0.996），0.625~12.5ug/ml（R²=0.999）；平均回收率分别为99.17%/99.06%和99.39%；RSD分别为0.8%、0.9%和0.9%。该法快速、灵敏、准确，适用于同时测定复方替米考星颗粒中三种成分的含量。
关键词：替米考星；黄安二甲氧嘧啶；甲氧苄啶；高效液相色谱法；含量 替米考星检测液相色谱仪
复方替米考星颗粒系用替米考星、黄安二甲氧嘧啶、甲氧苄啶按一定比例配置而成的新型制剂。它客服了替米考星单方抗菌谱窄，不合适我国养殖业以混合感染为主的疫病防治的要求等缺点，利用协同抗菌增效机理，将新一代抗生素替米考星与黄安二甲氧嘧啶和抗菌增效剂甲氧苄啶按较佳配比进行复方。临床主要用于革兰氏阴阳性敏感菌引起的感染，如呼吸道、消化道、泌尿道感染。该制剂具有抗菌谱广、抗菌效力强等优点。但目前尚无同时测定替米考星、磺胺二甲氧嘧啶及甲氧嘧啶含量方法的报道。本实验旨在建立高兴液相色谱法同时检测上述三种成份含量的方法。
1 实验材料
1.1仪器STI501高效液相色谱仪，配UV501检测器，；N2010色谱工作站；K型超声波清洗器，昆明市超声波仪器有限公司；DELTA320酸度计，BP-602N梅特勒电子天平；BP-211D电子天平，北京赛多利斯天平。
1．2药品及试剂 替米考星对照品，批号K0310711，含量91.0%，中国兽医药品监察所；黄安二甲氧嘧啶对照品，批号46H1351，含量99.0%,SIGMA公司；甲氧苄啶对照品，批号H016704，含量100.0%，中国兽医药品监察所。公试品为实验室自制小样。替米考星，含量86.0%，山西奥信动物药业有限公司提供；黄安二甲氧嘧啶原料，含量98.0%，市场购入；甲氧嘧啶原料含量100%，市场购入。乙腈为色谱纯；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1色谱条件
以Eclipse XCN-C18(250nm×4.6nm，粒径5um)色谱柱，Vertex C18色谱柱，以磷酸二丁胺缓冲液-乙腈-四氢呋喃-水（25:115:55:805）为流动相，检测波长280nm，进样量10ul，流速1.0ml/min，柱温30℃。出峰顺序为甲氧苄啶、黄安二甲氧嘧啶、替米考星顺式结构。理论塔板数大于3000，分离度大于1.5，拖尾因子均再0.90-1.10。2.2 溶液的配置
2.2磷酸二丁胺缓冲液的配置
取二丁胺16.8ml，加磷酸溶液（1-10）70ml，边加边搅拌，放置冷却后，用磷酸调节PH值至（2.5±0.1），加水至100ml，摇匀，即得。
稀释液配置 取水900ml，加入磷酸5.71g用12.5mlo/l氢氧化钠溶液调节PH值至（2.5±0.1）
0.5mg/ml甲氧苄啶对照液的配制 精密称取甲氧苄啶对照品25mg置50ml容量瓶中，加乙腈10ml使溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀。
复方替米考星对照液的配置 精密称取替米考星对照品25mg、黄安二甲氧嘧啶对照品12.5mg精密加入2.22项下0.5mg/ml甲氧苄啶对照液5ml，置同一50ml容量瓶中，加乙腈10ml超声使溶解，用稀释液稀释至刻度，摇匀。
2.3 系统适应性试验 取供试品溶液，按2.1项下色谱条件，进样10ul，系统适应性结果见表1和图1-4 结果显示，替米考星反式、顺势峰、黄安二甲氧嘧啶以及甲氧苄啶的理论塔板数均再3000以上，拖尾因子在0.90-1.10，分离度均大于1.5，说明该方法系统适应性良好。
2.4 线性关系考察 分别精密量取2.24项下复方替米考星对照液2.5、1.25、0.1、0.075、0.05、0.025、0.0125ml置10ml容量瓶中，用稀释液稀释至刻度，摇匀。精密吸取10ul，注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件分析，测定各自峰面积，以浓度为横坐标（X,ug/ml）,以峰面积为纵坐标（y），进行线性回归
参考文献：作者：闫春芝 林东下 赵红彦 秦朝英 机 构：中华人民共和国农业部.兽药质量标准【S】.2010版.57-59刊 名：中国兽药杂志, 2006(8): 26-27
关键词：替米考星 磺胺二甲嘧啶 甲氧苄啶 含量 高效液相色谱法（HPLC） STI501液相色谱仪测定 替米考星检测液相色谱仪
液相色谱仪常见四种故障处理方法1、出峰不佳，峰分叉 （1）色谱柱被污染。 （2）柱头填料塌陷。处理对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定），再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分（污染的填料），装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。 2、柱压高原因 （1）缓冲液盐分如（乙酸铵等）沉积于柱内。 （2）样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟；对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定），再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。 3、压力波动大，流量不稳定 原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。 4、既无压力指示，又无液体流过 （1）泵密封垫圈磨损。 （2）大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况，更换密封垫圈；对于第二种情况，在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
标签: 液相色谱仪 液相色谱仪 液相色谱仪常见四种故障处理方法_液相色谱仪 选购优良液相色谱仪应该考虑的地方选购一台品质优良的液相色谱仪应从以下几个方面考虑：
首先是如何看指标。液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等。我们认为要看主要技术指标，根据国家标准，仪器的主要指标有噪音，漂移，最小检测浓 度，定性定量重复性等。这些指标都要放在系统，回路里去看，去比较。就是需要把各单元装置都要联接好，如接好色谱柱，进样阀，并且要通上流动相。因为您在 分析中也都是联接好以后才可以进行分析的，而不是单单用个检测器或是泵的。
然后在这个基础上，我们再去比较这些主要指标。
1.噪音
是指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动。噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度，噪音越 大，检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好，否则噪音过大将会导致基线不稳，甚至影响分析结果。
2.漂移
是指仪器稳定后一段时间内基线漂离原点的距离，通常用来衡量仪器稳定快慢。高品质的仪器能在较短的时间内达到稳定，从而在一定程度上提高了分析效率。
3.定性定量重复性
主要是考核仪器稳定性的指标，这对于分析样品来说是非常重要的。好的仪器其稳定性应该是十分优秀的，这就要求多次进样保留时间及含量的一致性，这样做出来的结果才能使人信服。
4.最小检测浓度(最小检测限)
最小检测限是反映仪器灵敏度的重要参数。CL=2NdC/H(CL ：最小检测浓度 Nd:噪音 C：样品浓度最小检测浓度 H：样品峰高)由上式可见，最小检测浓度是和噪音成正比的，噪音越大，最小检测浓度就越大，灵敏度就越低。某些厂家回避了这个指标，说明他们不愿在最小检 测浓度的基础上去比较噪音。
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