1、液相色谱仪—气泡溢出
流动相内有气泡,关闭泵,打开泄压阀,打开purg键,清洗脱气,气泡不断从过滤器冒出,进入流动相,无论打开purge键几次,都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖,形成菌团,阻塞了过滤器,缓冲液难以流畅地通过过滤器,空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,超声清洗几分钟即可;亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时,轻轻震荡几次,再将过滤器用纯水清洗几次,打开泄压阀,打开purge键清洗脱气,如仍有气泡不断从过滤器冒出,继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中,如没有气泡不断从过滤器中冒出,说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏,流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀,打开泵,流速调至1.0～3.0ml/min,纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀,纯甲醇冲洗半小时即可。
2、液相色谱仪—柱压高原因
(1)缓冲液盐分如(乙酸铵等)沉积于柱内;
(2)样品污染沉积。处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水,低速正向冲洗柱子,待柱压逐渐下降后,相应提高流速冲洗,柱压大幅度下降后,用常温纯水冲洗,之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟;对于第二种情况,由样品的沉积引起污染的C18柱,和纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再用换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
3、液相色谱仪—既无压力指示,又无液体流过
(1)泵密封垫圈磨损;
(2)大量气泡进入泵体。处理对于第一种情况,更换密封垫圈;对于第二种情况,在泵作用的同时,用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
4、液相色谱仪—压力波动大,流量不稳定
原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物,使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量,保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底,避免吸入空气,流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物,拆下单向阀,放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
5、液相色谱仪—出峰不佳,峰分叉
(1)色谱柱被污染;
(2)柱头填料塌陷。处理对于第一种情况,先用纯水反向冲洗柱子,然后换成甲醇冲洗,接着用甲醇+异丙醇(4+6)冲洗柱子(冲洗时间的长短由样品污染的情况而定),再换成甲醇冲洗,然后用纯水冲洗,最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳,则考虑第二种情况。对于第二种情况,拧开柱头,检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分(污染的填料),装入新填料,滴一滴甲醇,填料下陷,再填,用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧,再填平,滴甲醇,再压紧反复几次,直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净,擦净柱外壁的填料,拧紧柱头,用纯甲醇冲洗30分钟以上。
6、液相色谱仪—峰面积重复性不佳
(1)进样阀漏液;
(2)加样针不到位。
(3)液量不足.
处理对于第一种情况更换进样阀垫圈;对于第二种情况保证加样针插到底,注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态,以保证进样量的准确。日常工作中,液相色谱仪的保养非常重要,如要注意不要让空气进入输液系统和高压泵中,储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液,每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净,防止无机盐析出或沉积;样品的前处理也很重要,任何样品都要尽可能地去除杂质,完全溶解,尽量减少对色谱柱的污染,以延长色谱柱的使用寿命,同时避免注射过浓的样品溶液,以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞;色谱柱作好标记,用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
正确的维护和保养高效液相色谱质谱仪，能够提高仪器使用寿命，使仪器稳定的工作得到稳定可靠的数据。
液相色谱仪部分：
一、
流动相的制备要求：
高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤；
流动相脱气至关重要（可采用抽滤，超声波脱气等方法。
二、
高压恒流泵的维护和保养
1．高压恒流泵为整个色谱系统提供稳定均衡的流动相流速，保证系统的稳定运行和系统的重现性。高压输液泵由步进电机和柱塞等组成，高压力长时间的运行回逐渐磨损泵的内部结构。在升高流速的时候应梯度势升高，每次升高0.2mL/min当压力稳定时再升高，如此反复直到升高到所需流速。
2．特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；清洗不成功则需要更换
3．在仪器使用完了以后，要及时清晰管路冲洗泵，保证泵的良好运转环境，保证泵的正常使用寿命。
YL9900 液相色谱质谱仪 LC/MS
三、
色谱柱的维护和保养
1．所使用的流动相均应为HPLC级或相当于该级别的，在配置过程中所有非HPLC级的试剂或溶液均经0.45um薄膜过滤。而且流动相使用前都经过超声仪超声脱气后才使用。
2．所使用的水必须是经过蒸馏纯化后再经过0.45um水膜过滤后使用，所有试液均新用新配。并且在进样的样品都必须经过0.45um薄膜针筒过滤后进样。
3．所使用到的最大流速为1.0mL/min，所以流速提升过程应是梯度提升，不存在流速的突升突降。
4．仪器检测完，均使用水：甲醇=90：10清洗了管路和色谱柱1小时以上，使用水：甲醇=90：10保存管路和色谱柱40分钟以上。
四、
工作站的维护
出现死机可重启计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障；或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。
液相质谱仪质谱部分：
七、死机处理的9个步骤
1.Analyst软件中Hardware configure重新deactive，再active。
2.用CTRL-ALT-DEL，Windows任务管理器结束任务，关掉Analyst软件,然后重新打开Analyst。
3.关掉Analyst软件，Stop Service后重新打开Analyst软件。
4.重新启动控制仪器的电脑，HPLC重新启动，再active。
5.StopService后进入Scu21.exe中，clear GPIB Bus。
6.StopService后进入Scu21.exe中，Reset System controller。
7.同时按下电源旁边的两个按扭reset。
8.重新开关仪器总电源。
9.StopService后进入Scu21.exe中。
※说明：一步不行，再使用下一步，不一定7步都需要做完
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高效液相色谱是目前应用较多的色谱分析方法，高效液相色谱系统由流动相储液体瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成，其整体组成类似于气相色谱，但是针对其流动相为液体的特点作出很多调整。HPLC的输液泵要求输液量恒定平稳;进样系统要求进样便利切换严密;由于液体流动相粘度远远高于气体，为了减低柱压高效液相色谱的色谱柱一般比较粗，长度也远小于气相色谱柱。
1、选择流动相时应注意的几个问题：
尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。
避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。
试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。
流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有较强的紫外吸收，一般检测波长应大于流动相的截止波长。
2、泵的维护保养：
防止任何固体微粒进入泵体，否则会磨损柱塞、密封环缸体和单向阀，因此应预先对流动相进行过滤，可采用Millipore滤膜(0．22μm或 0．45μm )等过滤。泵的入口都应该连接砂滤棒(或片)， 输液泵的滤器应经常更换。
流动相不应含有任何腐蚀性物质， 含有缓冲液的流动相不应保留在泵内， 尤其是停泵过夜或更长时间。分析工作结束后必须用纯水充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂(对于反相键合固定相，可以是甲醇或甲醇和水)
泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、密封环或缸体，最终产生漏液。
输液泵的工作压力不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。
3、紫外检测器维护保养：
流通池进入气泡会干扰基线，并极难排出，应使用充分脱气的流动相，以减少气泡的产生。
应定期冲洗系统，避免流通池干涸。
检测器中氘灯( 光源) 随着使用时间的增加，氘灯强度降低，噪音会不断增大，故分析前柱平衡得差不多时，再打开检测器，分析工作结束及时关闭检测器（频繁开关检测器也会缩短检测器寿命，一般开启间隔少于4小时，不建议关闭检测器）。
尘埃在静电的作用下容易覆盖在光学元件上， 使光传播效率降低，增加了光散射， 影响分析效果， 因此检测器周围的环境应保持清洁。
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