二手液相色谱仪 岛津高效液相色谱仪的日常应用维护
一 、岛津高效掖相色谱仪的日常分析注意事项
1.关于试剂
试剂类别：有机溶剂 无机化合物 水
试剂的要求：(1)有机溶剂的级别HPLC以上专用试剂。
(2)无机化合物要求分析纯以上。
(3) 水要求是去离子纯净水。
2.流动相
要求： (1)无气泡，通过超声脱气，通氦气等方法进行脱气。
(2)纯净无杂质，常用方法为用0.45微孔过滤膜进行过滤。
3. ODS柱的注意事项
(1) 压力 注意每根柱的耐压(最大使用压力)。
(2) PH的范围 不同柱子的PH值范围有所不同。
(3) 清洗 柱子需要必要的清洗，请用户参考柱子的说明书。
(4) 保存 长时间不使用柱子时需要合适的试剂进行保存，请参考柱子的说明书。
4. 样品的注入方式及进样量
(1)注入方式 在INJ位置将进样针插入，然后再将手柄扳到Load位，在Load位时将样品匀速推入定量环，在从Load位扳到INJ位置即完成进样过程。
(2)进样量 对于20微升定量环，进样量20微升以下，5微升以上可用微量注射针进样(看刻度)。5微升以下可能回会造成样品重复性变差。20 微升以上(利用定量环)建议用户注射量为定量环的3倍以上，即大于60微升。
以上建议主要是减少进样误差，提高重复性。
5. 检测器的背压及各种检测池的耐压
(1)紫外检测器 耐压< 30kg/cm2f
(2)检测器荧光 耐压< 30kg/cm2f
(3)示差检测器 耐压< 30kg/cm2f
检测器后面加一些背压主要目的是防止气泡滞留在检测器中。
二、高效液相色谱的常见故障及排除方式
1、 关于吸滤过滤器堵塞
现象： 塞吸现象、管路中不断产生气泡
处理方式：将吸滤头1从溶剂管中拔出，放在正己烷
或稀硝酸(一般<10%)中超声清洗。
2、 在线过滤器堵
现象： 不连接柱子及管路、混合器(松开泵进混合器或柱子的管路接头)，设定泵流速为1ml/min，泵压力大于0.3MPa，说明在线过滤器堵。
处理方式： 一般建议用户更换新的过滤器，仪器型号：LC-10ADVP, LC-10ATVP, LC-20A，LC-20AD, LC-10AT, LC-8A, LC-6AD等可以将在线过滤器拆下，用稀硝酸(浓度小于10%)，进行超声清洗。
3、 压力波动的原因及处理方法
产生波动的原因： 有气泡
密封圈有磨损，产生微量的泄液
进口单向阀中有异物(较常见)
在线过滤器，管路，柱子进口处有盐析出或杂物
处理方法： 流动相进行脱气，排除流路中的气泡
更换密封圈
清洗进出口单向阀，将单向阀置于烧杯中，用异丙醇进行超声清洗
检查并清洗过滤器及流路
4、 混合器堵及解决方法
双泵高压梯度系统有高压混合器，长时间使用后会产生不同程度的内部过滤器堵。
处理方法：
(1)先把混合器的预混合腔整体拆下，再拆下1号和2号处。
(2)建议用户不可拆开2号和3号之间的连接。
(3)取出混合器内部的过滤器5-1。
(4)将过滤器置于稀硝酸中进行超声清洗。
5、引起柱压升高的原因
色谱柱长时间使用后用户发现柱压比以往要高出许多，造成此情况可能由以下几个因素引起。
(1) 在线过滤器堵。
(2) 高压混合器堵。
(3) 进样器堵。
(4) 流路中部分细管堵。
(5) 流通池堵
(6) 柱子内部吸附样品产生堵
确认发法：进行分段检测，确认的确是柱子压力高还是以上5点原因中某个引起的。
6、进样峰分叉的原因
A) 流路及柱子等没有做任何改变的情况下，分析样品时，被检测峰产生分叉，则说明保护柱或分析柱柱效下降，需再生保护柱或分析柱。
B) 柱的出口到检测池的管路偏长或管路内径宽所致(常用内径0.3mm以下),导致样品扩散,造成峰分叉。
7、 什么情况下需更换D2 Lamp
A) 在SPD-10A, SPD-10Avp,SPD-20A上查看参比池的能量，若能量值(REF EN )偏低(220nm时)，一般在400以下，则被认为需要更换氘灯。
B) 显示D2 Lamp ERROR时，一般情况下认为氘灯不良需更换。
C) 氘灯超过使用时间(较多2000小时)，需要更换氘灯。
8、 造成检测池能量低的原因
A. 氘灯使用时间过长(大于2000小时)，灯老化所致
B. 光路系统受到污染或老化
说明：检测池能量高低以参比池为准。
9、 检测池中有气泡如何排除
1一般情况下，很小的气泡会停留在检测池中，所以需要在池管路出口1处加一个背压管，池中气泡不易在池中产生。(加背压：出口处加上一段阻尼管增加压力)
10、 如何清洗流通池
一般情况下，请用户不要将池拆散，而是用仪器附带的工具进行清洗。 常用流程：水-----甲醇-----异丙醇-----甲醇，或再用稀硝酸冲洗池流路。
11、 基线漂移，噪音增大的原因。
1、 所用试剂不纯
2、 整个流路系统不干净
3、 流动池污染
4、 氘灯使用时间过长
5、 电压不稳，或者有环境干扰
6、 柱子污染等因素
12、 梯度洗脱时可能产生的干扰峰
在进行梯度洗脱时，由于溶剂的变化，导致吸光度背景值的该改变。所以会产生基线上下波动，这是正常现象。由于不断的洗脱。特别是水及无机盐混合的流路，流过柱子后部分杂质被柱子吸附，随着体系洗脱液极性的变化，以及在不同的检测波长下，某些成分被检测，导致在没有进样情况下，基线上出现峰，即被认为干扰峰。
13、 ODS柱的再生
ODS柱子使用一段时间后可能会导致柱效下降，此时需要对柱子进行再生，提高柱效。
1. 甲醇冲洗半小时
2. 三氯甲烷冲洗十分钟
3. 异丙醇冲洗十分钟
4. 三氯甲烷冲洗十分钟
5. 甲醇冲洗半小时
说明：柱使用时间的长短与被分离的样品有很大的关联，所以碰到像生物样品、血制品、发酵产品等中均含有不同程度的蛋白质及大分子量的组分，柱子很容易损坏，柱效易下降。这种情况下用以上方式进行再生几乎没有明显的改变。
1、泵正常工作时，在流动相和流速不变的前提下柱压应该是稳定的，当然在换流动相时压力变化是正常的，正常情况下如果柱压升高基本上都是由色谱柱使用时间长引起的（只有更换色谱柱），如果正常情况下压力突然降低有可能是（1）接头处有漏液的地方，采取的方法是有滤纸检查，如有漏液的地方用扳手拧紧即可。如果没有漏液则可能是（2）白色的管子里面有气泡从而导致流动相进不到泵里面去，采取的方法是排气泡。排气时:先STOP停泵--打开排气阀--按PURGE（快冲）键--等气泡排完后先STOP停泵--拧紧排气阀，其先后步骤不要搞反了。
2、泵正常工作时zui高压力不要超过200KG，所以打开泵以后可以将泵的zui大压力调到200KG，这样如果压力超过上限则会自动报警停机，流速不用超过1ML/MIN，如果使用时压力超过200KG，建议将流速调低点以降低压力（在色谱柱正常的情况下），如果是因为色谱柱长时间使用造成压力升高则建议更换色谱柱（因为色谱柱属于耗材长时间使用就需要更换，更换的主要依据色谱柱出峰不正常或者柱压力过高）。
3、泵正常工作时平均每15天左右向注油孔加润滑油2-3滴。
4、流动相里面如果有盐或酸类，做完实验后要先用95%二次蒸馏水与5%甲醇洗色谱柱40分钟左右，然后用纯甲醇洗30分钟左右才可以关机。第二天如果继续做实验流动相里面仍旧有盐或酸类，先用95%二次蒸馏水与5%甲醇过渡20分钟，再用流动相。如果流动相里面只有甲醇，水，乙腈，做完实验后就不用95%二次蒸馏水5%甲醇冲洗，可直接用纯甲醇洗30分钟即可关机。
5、C18色谱柱的耐酸PH值范围3-8使用时不要超出。
6、仪器长期不用时一定要将滤头泡在甲醇里半月开机一次，如果开机时泵抽不上液可以打开排气阀按PURGE快冲。
7、调反压器时要注意等液体流出来以后才能调，一般调8--10KG，比如现在泵显示屏显示柱压50KG那再增加10KG显示屏上显示柱压60KG然后拧紧锁紧螺母。
8、关机顺序：清洗液路时可以把检测器直接关机，清洗结束后先按STOP让泵停止后再关电源，不允许直接关机
反相高效液相色谱柱是基于溶质、极性流动相和非极性固定相表面间的疏水效应建立的一种色谱模式，任何一种有机分子的结构中都有非极性的疏水部分，这部分越大，一般保留值越高。
在高效液相色谱中这是应用面较广的一种分离模式，在生物大分子的反相液相色谱条件下，流动相多采用酸性的、低离子强度的水溶液，并加一定比例的能与水互溶的异丙醇、乙腈或甲醇等有机改性剂，大量使用的填料为孔径在30纳米以上的硅胶烷基键合相，除此之外，也有少量高聚物微球。
反相高效液相色谱柱的使用和维护
在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
(1)柱子在装卸、更换时，动作要轻，接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动，以免柱床产生空隙。
(2)如果仪器用来做常规分析，样品种类有限，但分析次数多，则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱，这样有助于延长柱子的寿命。
(3)避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。
温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应该缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
(4)应逐
渐改变溶剂的组成，特别是反相色谱中，不应直接从有机溶剂改变为全部是水，反之亦然。
(5)如使用柱温控制装置时，应注意在通人流动相后才能升温。
(6)一般说来反相高效液相色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。
(7)选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一个预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和”，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
(8)避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注人柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一个保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
(9)经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右，即常规分析需要50-75mL。
(10)保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
(11)反相高效液相色谱柱使用过程中，如果压力升高，一种可能是烧结滤片被堵塞，这时应更换滤片或将其取出进行清洗；另一种可能是大分子进人柱内，使柱头被污染；如果柱效降低或色谱峰变形，则可能柱头出现塌陷，死体积增大。
(12)在完成分离分析工作之后，不应立即停机，需及时对色谱分析系统进行冲洗，一般0.5h以上，以除去色谱柱内的杂质。
在日常分离分析工作中，反相高效液相色谱柱的正确使用和维护十分重要，色谱柱使用是否得当，直接影响色谱柱的寿命，稍有不慎就会降低柱效、缩短使用寿命甚至损坏。
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