高效液相色谱仪脱气常用方法
在食品分析中，无论是残留分析还是成分分析，HPLC 也已成为不可或缺的分析仪器。流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。下面分析一下，高效液相色谱脱气的必要性，并总结归纳了脱气常用的方法。
一、脱气的必要性
流动相脱气是HPLC 系统能得到可靠数据的一个很有效的措施。HPLC 泵在输送液体时要产生很大的力量，由于气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，我们发现瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大，液相泵将不能输送任何溶剂，而且如果压力低于预先设定的压力低限，泵将停止工作。当一个气泡通过输液泵时，由于系统压力大，气泡通常会溶解在流动相溶液中，随流动相通过柱子。但是到达检测器流通池时系统压力又恢复到了大气压，因而气泡可能在检测器流通池中又显现，在色谱图上会出现不规律的毛刺。
二、脱气方法
1. 吹氦脱气法。
利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa 压力下，以约60 mL/min 流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排除溶解的空气，能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L 氦气通过1L 流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好，但氦气价格较高，很少使用。
2. 加热回流法。
此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。
3. 抽真空脱气法。
此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa ，即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化，从而影响到实验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。
4. 超声波脱气法。
将欲脱气的流动相置于超声波清洗机中，用超声波震荡10～20min。此法的脱气效果最差。
5. 在线脱气法。
HPLC 仪器可配在线脱气机。在线脱气使用简单，低故障，有效。
为了保证高效液相色谱结果的准确性，脱气是一个当要的环节。
三聚氰胺即蜜胺，又称氰尿酰胺，是一种白色晶体，含氮量高达66.7%，在食品和饲料中添加三聚氰胺，可以提高含氮量，冒充成高蛋白食品，从而大幅度降低成本。目前，测定粗蛋白的含量常用凯氏定氮法，而凯氏定氮法只能测出含氮量而无法测出氮的来源。从而造成如2007年美国宠物食品污染事件和2008年中国毒奶粉事件等严重的食物安全事故。调查显示，不法商贩在渔用饲料原料鱼粉中添加三聚氰胺，以次充好谋求利润，一旦用此类原料制造出来的饲料，必然可以检出三聚氰胺，但含量均不高。
农业部已命令禁止在饲料中人为添加三聚氰胺。2009年6月8日起农业部发布第1218号公告，将饲料原料和饲料产品中三聚氰胺限量值定为2.5mg/kg。目前饲料中三聚氰胺残留的检测方法主要是气相色谱法、液相色谱法和质谱法。国内标准NY/T 1372-2007《饲料中三聚氰胺的测定》中采用液相色谱法和气质联用法检测饲料中的三聚氰胺含量，检测限分别达到2和0.05mg/kg。考虑到由于质谱法检测设备昂贵，色谱法更具普及性。由于渔用饲料中三聚氰胺的含量不公开，且饲料中的杂质成分复杂，所以要求检测方法有更高的灵敏度和更好的稳定性。根据国家对于饲料中三聚氰胺的限量要求，研究采用离子交换分离柱-液相色谱法测定渔用饲料中的三聚氰胺的方法，该方法简便，重现性好，结果准确可靠。
仪器准备
仪器简介
LC-600A智能全控液相色谱系统由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等，实行多元高压洗脱、波长扫描等功能。
应用领域
化合物检测、法医毒物分析、蛋白质组学食品检测、药物分析、环境分析、聚合物分析
色谱条件：
色谱柱 | 阳离子交换柱（SCX）， 250mm×4.6mm （内径），粒度5μm |
流动相 | 磷酸二氢钾（50mmol/LpH=4.6）+乙腈=70:30 |
流速 | 1mL/min |
检测波长 | 240nm |
柱温 | 35℃ |
进样量 | 20μL |
谱图分析：
故障现象：
峰展宽
可能的原因：
(1)进样体积过大
(2) 柱外体积过大
(3) 流动相粘度过高
(4) 保留时间过长
(5)样品超载
(6)缓冲液溶度太低
(7)保护柱污染或失效
(8)色谱柱污染或失效，柱效太低
(9)呈现两个或多个未被完全分离的峰
(10)柱温过低
YL9100液相色谱仪
排除方法：
(1)减小进样体积
(2)检查各接头处的连接，避免死体积形成
(3)增加柱温，采用低粘度流动相
(4)等度洗脱时增加强溶剂浓度，或采用梯度洗脱
(5)稀释样品，或采用小体积进样
(6)增加浓度
(7)更换保护柱
(8)清洗或更换色谱柱
(9)选择其他色谱柱改善分离效果
(10)适当提高柱温
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