液相色谱的柱前衍生和柱后衍生
1、为什么要衍生?
衍生化较为主要的目的就是提高目的物的可检测性。对于GC来讲，多数是为了增强目的物挥发性或者改善目的物极性;对于HPLC来讲多数是为了提高检测器对目的物的相应。
2、衍生化分类：柱前衍生和柱后衍生。柱前衍生是在经过分析柱前使分析物与衍生剂反应，反应产物在分析柱上实现分离，实际分离的是衍生产物，检测的也是衍生产物;柱后衍生是分离物在分析柱中实现分离后，在衍生池内与衍生剂反应，在柱子中分离的是目的物，在检测器处检测的衍生产物。
3、适用的化合物：生物酸/碱、胺类、抗生素(聚醚类抗生素多见)和氨基酸类。
4、衍生化要求?
1)衍生剂必须过量且稳定;不过量反应不完全，检测不充分。不稳定，重现性差。
2)衍生物、衍生产物和衍生副产物至少是好分离的。当然如果只能检测到衍生产物可以。
3)衍生反快速完全。反应慢，柱前衍生还可以，但柱后不行。因为流速固定，衍生池管路长度一定，留给衍生化的时间是一定的。柱前衍生可以在系统外等衍生完毕后进样，但也是影响效率的。
5、两种衍生比较
柱前衍生优点是，对设备要求不高，可以手工衍生，而且对衍生时间要求相对宽泛。缺点是，引入了过多的物质，如：衍生剂、衍生产物(当然这个是检测需要的)和衍生副产物，对柱子有潜在的负面影响，另如采用手工衍生也会引入过多的认为因素。
柱后衍生优点是，重现性好，人为因素少，引入物质比较少。缺点是，可能有扩散问题，在柱子中分离结束后，就存在扩散，如果衍生慢(必然流速低)、管路长扩散问题就会比较严重，再有就是要求有一套外源的泵系统和一个检测池，对于设备要求较高。
高效液相色谱仪分析中，选择流动相时应考虑流动相与填料的作用、纯度、与检测器的匹配、粘度、对样品的溶解度和样品回收等方面。
1、流动相与填料的作用：
流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩，从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝和氧化镁等吸附剂的柱系统。
2、纯度：
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关，特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
3、与检测器的匹配：
当使用UVD时，所用流动相在检测波长下应没有吸收或吸收很小。
当使用RID时，应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相，以提高灵敏度。
4、粘度：
高粘度溶剂会影响溶质的扩散和传质，使柱效降低，还会使柱压增加，分离时间延长。尽量选择沸点在100℃以下的流动相。
5、对样品的溶解度：如果溶解度欠佳，样品会在色谱柱内沉淀，不但影响纯化分离，而且会使色谱柱恶化。
6、样品回收：应选用挥发性溶剂。
高效液相色谱仪分析选择流动相时应注意的问题：
1.尽量使用高纯度溶剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。不纯的溶剂会引起基线不稳，产生伪峰。
2.避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降和损坏色谱柱，如使固定液溶解流失和酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。
3.样品在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。
4.流动相粘度低（粘度适中）。若使用高粘度溶剂，会增高压力，不利于分离。常用低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度过低的溶剂也不宜采用，如戊烷等，它们容易在色谱柱和检测器内形成气泡，影响分离。
5.化学稳定性好。
6.流动相应满足检测器的要求。
对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长长。所谓溶剂的紫外截止波长是指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂被看作是光学不透明的，会严重干扰组分的吸收测量。
对于示差折光检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达到zui高灵敏度。
液相色谱仪，看你分离的样品的种类，看流动相是否和样品互溶，分离程度，一般加水多少，甲醇，乙腈很多种，看样品的沸点，溶解性。
标签: 高效液相色谱仪 高效液相色谱仪标签： 关于高效液相色谱仪流动相的选择如何呢？_高效液相色谱仪组合标题： 液相色谱仪的密封圈更换是所有液相色谱分析人员都必须学会的方法。各类型的检测仪器有不同的操作方法，可以参照各自的使用手册，简要介绍如下。
、准备好工具和所需部件。工具包括扳手、超声清洗器、密封圈安静工具、新密封圈。用水-甲醇冲洗泵，拆开进出口管道，在泵头和单向阀上标出液流方向。
第二、将柱塞杆缩至小，松开泵头的收紧螺钉，小心托住泵头。操作时要注意处处以平衡的动作慢慢退出泵头，切不可摇动或上下左右摆动泵头。
第三、从密封圈孔中轻轻拔出旧密封圈，注意不要化泵头内壁，要毫不犹豫地随即扔掉旧密封圈。
第四、将泵头和新密封圈分别放入甲醇中超声清洗，同时用无纤维纸擦洗柱塞杆。察看柱塞杆上有无划痕，如有划痕应换新柱塞杆然后再安装密封圈，
第五、安装新密封圈。这一步要用专门的安装工具，切不可粗心大意，避免损坏密封圈。
第六、重新装上泵头。先在柱塞杆上滴几滴甲醇以湿润，滑动泵头到位。千万不能摇动或摆动，以防柱塞杆在这一步操作时折断。平衡地上紧固定螺丝，接上进液管道。
后、打脱气甲醇到泵腔中，不断用纸巾从泵出口处吸去流出的液体，等到无气泡一处再接上输出管道，打开放空阀，继续抽20mL甲醇赶走气泡后，换成需要使用的流动相。
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