色谱柱保留值与分离度重现性不好原因 色谱柱是如何工作的

    通用型反相色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要留意：液相色谱柱柱性能可能由于所使用的样品、活动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是较佳条件），只有这样，测得的结果才有可比性。

    通用型反相色谱柱样品的前处理：

    a、可以使用活动相溶解样品。

    b、使用予处理柱除往样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。

    c、使用0.45μm的过滤膜过滤除往微粒杂质。

    通用型反相色谱柱的保养：

    通用型反相色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为评价柱性能变化的参考。

    但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是较佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。在对色谱柱使用前进行测试以后，要根据不同的情况对色谱柱进行保养：

    ①通用型反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。

    注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。

    ②长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度可以是室温。

色谱柱安装时需要注意的事项 　  色谱是一种分离分析手段，分离是核心，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类。多为金属或玻璃制作。有直管形、盘管形、U形管等形状。液相色谱通常均采用填充柱。色谱柱的分离效果取决于所选择的固定相，以及色谱柱的制备和操作条件。下面介绍色谱柱安装时需要注意的事项。

　　色谱柱的安装：

　　1)将液相色谱装置中的流动相完全置换后再连接色谱柱，并完全排出流路内的空气。

　　装置内的液体和所使用的流动相不能相溶的情况下，使用双方都能相溶的液体做过渡。比如从水置换到氯仿的情况，就需要使用丙酮做过渡，才能完全置换。

　　将盐溶液置换成有机溶剂的时候，需要通过纯水、丙酮的顺序来进行置换。相反，从有机溶剂转换成盐溶液的情况下，需要通过丙酮、纯水的顺序置换。

　　不仅仅是泵，流动相流动的所有流路都必须进行置换。例如，注入样品的情况，软管内的液体也需要置换。另外，如果使用压力计等别的软管的情况，取下来的管子也必须由流动相洗净后才能继续使用。

　　2)色谱柱保存方法不对或者长期不使用的情况下，色谱柱的出入口可能会有空气残留。这种情况下，必须先把空气完全排出后才连接到装置中。

　　避免快速加热，加热温度不要超过色谱柱的最高负荷温度。

　　把柱子入口侧的螺栓打开，然后加温(一般加温到手心感到温暖的程度就足够了)，等液体满出来以后接到装置上。然后，打开出口处的螺栓，用泵送液，等确认出口处有液体流出后，连接到装置中。这样操作，就算后面再连接一根色谱柱也能完全除去空气。

　　3)在泵运作的时候连接色谱柱。确保能让流动相按照色谱柱上箭头的方向流动的状态连接色谱柱。

　　4)色谱柱加温使用的时候，先用0.2～0.3mL/min的低流量一边送液一边升温。达到所定温度后，再渐渐的增加流量至测定流量。

　　5)色谱柱需要安定时间。连接到装置中立即进行测试的情况下，第一次很难得到好的分析结果。