色谱柱日常维护
每天用足够的时间来维护色谱柱，您将节省更多有利于处理色谱柱故障的时间，调试您的色谱柱的寿命也会变得更长，色谱柱的使用寿命，除了与所分析的样品和流动相及使用频率有关，最主要的是与日常维护密切相关。色谱柱的使用寿命主要根据柱效和柱压两个指标来衡量，如果一支色谱柱的柱效太低或者太高，通常被认为该色谱柱的使用寿命已尽结束。因此，延长色谱柱的使用寿命关键是，清除引起柱效下降和柱压升高的因素，通过以下几点帮战您完成色谱柱的日常维护工作。
一、流动相的pH应在使用范围内
以硅胶为基质的反相色谱柱的pH范围为2~9，流动相超过其pH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂，使柱效下降，寿命变短。
二、去除样品和流动相汇总的固体颗粒
样品和流动相中含有固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板，不仅会引起柱压的升高，而且也会引起柱效下降。因此，建议使用超纯水和色谱纯试剂，在分析前对样品进行针筒过滤，流动相过0.45um滤膜。
三、使用保护柱或在线过滤器
保护柱和在线过滤器上都有筛板，其孔径与色谱柱筛板孔径相同，因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱，有效防止色谱柱筛板的堵塞。由于柱压升高在分析故障中占很大比例，因此除对样品和流动相进行过滤外，建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器。
四、正确使用缓冲盐
缓冲盐使用不当会使其在流动相（含有机溶剂）中析出，堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙，使填料板结，柱压上升；同时阻碍了基质上的键合的碳链自由舒展，使用色谱柱的保留能力下降，柱效降低。
建议使用前要过滤，使用后要冲洗。具体方法如下：
1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需要过滤流动相1.0ml/min流速冲洗60min.
2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前，用与初始流动相组成相同的过滤流动相似1.0ml/min流速冲洗60min；分析完成后，再用该过滤流动以1.0ml/min冲洗色谱柱120min。含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓，以避免梯度过程中缓冲盐析出。
五、柱清洗方法：
1、未使用缓冲盐：每天分析完成后，用纯甲醇或纯乙腈反向冲洗色谱柱60min。
2、使用过缓冲盐：分析完成后，先后用上述方法除去缓冲盐，然后再用纯甲醇或乙腈反向冲洗色谱柱60min。
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凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离分析技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果。
凝胶色谱法又称分子排阻色谱法。凝胶色谱主要用于高聚物的相对分子质量分级分析以及相对分子质量分布测试。目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛采用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。
那么，凝胶色谱柱应该如何进行清洗和存放呢？
1.色谱柱的清洗。
为了不使被测物质和杂质停留在色谱柱中，在每次的样品分析工作完成之后，都应及时地清洗色谱柱。首先要用对被测样品洗脱能力强的溶剂来洗脱色谱柱，以分析工作中常用的反相色谱分析法为例，因其先流出的物质是极性大的物质，此时应用100%的甲醇或使用异丙纯、四氢呋喃等极性稍弱的溶剂将吸附在柱内的极性小的物质洗脱下来，洗脱液的用量一般为柱体积的20倍即可。如果流动相是缓冲溶液，则应先用蒸馏水来冲洗色谱柱，以冲掉柱内的盐，然后再用合适的溶剂来冲洗。
2.色谱柱的存放。
如果色谱柱暂时不用，存放时要注意以下几点：
a.几天之内的短期放置，凝胶柱则用蒸馏水来冲洗，再把色谱柱的两头用密封螺丝密封好即可。
b.如果色谱柱长期不用，仅用上述方法来处理就不行了，这时应使用色谱柱使用说明书中所指明的溶剂来充满色谱柱，凝胶柱则不能用水了，因柱内如果有微生物的生长则会使柱效降低，此时应用0.05%的NaNs水溶液(防腐剂)来冲洗色谱柱，再将色谱柱封严。色谱柱长期放置时，一定要将色谱柱的两端封严，以防止由于溶剂挥发而造成的柱填料干缩现象，因这可导致柱效的严重降低。
c.色谱柱应贮存在室温下，如果放置于0℃以下的环境里，柱内就会结冰，这也将导致柱效的降低。
色谱柱压力过高或低的原因
色谱柱是高效液相的心脏，在液相色谱仪的使用中，保持色谱柱的柱效、容量和渗透性，延长柱子的使用寿命是非常重要。色谱柱压力过高、过低都属于柱压问题。色谱柱压升高一般是由于柱床内产生了杂质，造成流体阻力加大所致。下面大致总结为以下几个方面： 1、流动相的前处理： 流动相或杨平中杂质堵塞色谱柱进口滤片，导致压力升高。这是由于流动相可能没有过滤，或过滤不彻底，使固体杂质滞留于滤板上所致。另一个方面也可能没有使用预保护柱所致。 2、样品的沉淀： 当流动相与溶解样品的溶剂不一致时，样品进入色谱柱时，可能因溶解度降低而沉淀出来吸附于柱内，造成压力升高。 3、晶体的析出： 使用含有缓冲液的流动相时，缓冲液中的无机盐可能会残留在体系之中，它们会因在新流动相中的溶解度降低而析出阻塞而压力升高。 4、细菌或霉菌滋生： 流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长霉菌堵塞滤板，导致压力升高。所以在使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。 5、溶质吸附： 一些溶质在色谱柱上有较强大的吸附力，洗脱时流动相也难以清除掉，累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大从而造成压力升高。 6、流动相更换过度较快： 当改变流动相体系时，不彻底的更换使不同性质、互不混溶的流动相存在于同一个体系之中，也会造成压力升高。 7、压力脉冲： 运行过程中，有时会产生整个液相色谱仪系统内压力的突然升降。如泵压力变化，此所形成的压力脉冲会造成多孔填料的崩坏和柱床结构的微小变化，填料微屑的长期积累也可能会使柱床阻力增大，造成压力升高。
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