高效液相色谱和气相色谱在基本理论方面没有显着不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质的差别。
高效液相色谱分析原理：
一、高效液相色谱分析的流程：由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。废液流入废液瓶。遇到复杂的混合物分离极性范围比较宽、还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而HPLC改变的是流动相极性，使样品各组分在较好条件下得以分离。
二、高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
二、高效液相色谱的分离过程：同其他色谱过程一样，HPLC也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
开始样品加在柱头上，假设样品中含有3个组分，A、B和C，随流动相一起进入色谱柱，开始在固定相和流动相之间进行分配。分配系数小的组分A不易被固定相阻留，较早地流出色谱柱。分配系数大的组分C在固定相上滞留时间长，较晚流出色谱柱。组分B的分配系数介于A，C之间，第二个流出色谱柱。若一个含有多个组分的混合物进入系统，则混合物中各组分按其在两相间分配系数的不同先后流出色谱柱，达到分离之目的。
不同组分在色谱过程中的分离情况，首先取决于各组分在两相间的分配系数、吸附能力、亲和力等是否有差异，这是热力学平衡问题，也是分离的首要条件。其次，当不同组分在色谱柱中运动时，谱带随柱长展宽，分离情况与两相之间的扩散系数、固定相粒度的大小、柱的填充情况以及流动相的流速等有关。所以分离最终效果则是热力学与动力学两方面的综合效益。
1、流动相的抽滤要求
色谱纯试剂，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤。
2、吸滤头
特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；清洗不成功则需要更换。
3、单向阀
如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的反相放置在小烧杯中，切记不可与安装方向倒置超洗！
4、泵头
泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液，或更换柱塞杆及其密封垫等)。
5、过滤片
当色谱峰出现异常情况时，有可能是此部件被污染，拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。
6、排液阀
此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损，可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。
7、手动进样器
平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗；如出现漏液现象，原因极可能为转子密封垫磨损或污染，一般须申请维修或更换配件。
8、流通池
在色谱峰不正常时可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗(可根据说明书进行操作或申请维修)。
9、工作站
出现死机可重启计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障；或在本机上重新插拨接口、重新安装软件。
高效液相色谱仪光电二极管阵列检测器（DAD）是20世纪80年代出现的一种光学多通道检测器，是紫外检测器的重要进展，又称快速扫描紫外检测器，在高效液相色谱中得到大量使用，是高效液相色谱具有发展和建议的检测器。
一、可以同时得到多个波长的色谱图，计算不同波长处的相对吸收比。
二、可以在色谱分离同时，对色谱峰的指定位置实时记录吸收光谱图，并得到最大吸收波长。
三、在色谱运行期间，可以逐点进行光谱扫描，得到时间、波长和光强度的三维谱图。
四、选择性好。可以选择宽波带进行检测，能一次把所有组分检测出来。
五、光学通量低（带宽通量较窄）。
六、与普通UVD相比更复杂，容易漂移。
七、灯输出能量随时间降低。
八、DAD的一些特殊功能：
1、色谱峰的准确定性。
2、色谱峰的纯度检验。
3、.选择较好波长。
4、建立光谱库，检索被测样品的光谱。
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