液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝（封头）与柱填料等组成。
柱管：
多用不锈钢制成，若果使用时柱压不高于70 kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。
压帽：
即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板。
密封环：
位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。
色谱柱使用前注意事项。
色谱柱在使用前，最hao进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最jia条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。
但要注意：
柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理
a、最hao使用流动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、使用0.45μm或0.22?m的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、流动相的配制
液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：
a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保留在柱中)。
b、流动相与样品不产生化学反应
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果；降低柱压降，延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度)。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，最hao使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。
f、在流动相配制好后，一定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择
因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。
对于一根特定的色谱柱，要追求最jia柱效，最hao使用最jia流速。
对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。
当选用最jia流速时，分析时间可能延长。
可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意：
a．含水流动相最hao在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜。最hao加入die氮化钠，防止细菌生长。
b．流动相要求使用0.45 μm或0.22m滤膜过滤，除去微粒杂质。
c．使用HPLC级溶剂配制流动相，使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命，提高柱性能。
液相色谱仪由高压液体泵分离系统、检测器及液相色谱柱（含柱温控制系统）等三部分组成。其中液相色谱柱的正确使用，是液相色谱工作的关键，也是采用液相色谱方法获得准确实验数据的必由之路。
一套无论多么完美的液相色谱仪，如果得不到优质的色谱柱支持，也只能成为一台液体输送泵而已，毫无价值可言。反之，一根无论多么好的色谱柱，如果得不到完美的液相色谱仪的控制，其作用与价值也会大打折扣。所以，液相色谱仪的性能决定了液相色谱的技术控制性能和数据采集与处理性能；液相色谱柱的性能直接关系到分离分析的准确性与适用性，必须达到很高的性能才能为科学实验提供强有力的数据支持。二者必然相互影响相互促进。
液相色谱柱的结构及主要功能:
液相色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝（封头）与柱填料等组成。
柱管：多用不锈钢制成，若果使用时柱压不高于70kg/cm2时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。用于柱填料的装填。
压帽：即色谱柱两端套合于柱管端外壁的塑性圆柱帽，中部有小孔，多为聚四氟乙烯制成，用于固定筛板。
密封环：位于接头螺旋环内壁的弹性环，多为聚四氟乙烯制成，用于色谱柱两端压帽与柱外壁的密封。
筛板：位于色谱柱两端紧贴柱管端的筛网状薄片，由烧结不锈钢或钛合金制成，孔径取决于填料粒度，一般为0.2~20&um(5~10&um)。用于防止填料从柱管内漏出。
接头：柱两端连接流动相与柱管的中空环套，由不锈钢制成。用于柱管路联通与柱端高压固定。
封头：柱两端的密封螺丝，用于保存色谱柱时封头。
柱填料：装填于柱管内的固定相担体，其直接决定了色谱柱的类型与用途，是色谱柱的核心。多为无定形或球形硅胶基质，也有环糊精、活性炭、聚苯乙烯-二乙烯基苯、聚甲基丙酸酯、氧化铝等基质。用于色谱分离。
色谱柱是运用于色谱仪系统中起着分离作用的仪器，是色谱仪分析系统的核心部件，色谱柱柱效的高低影响着检测速率的快慢以及检测结果的准确性。因此，为了提高色谱柱的柱效，保证液相色谱仪分析检测的灵敏性，了解液相色谱柱的选购技巧尤为重要。
选择液相色谱柱时需要考虑的主要因素包括：键合相、粒径、孔径、碳载量，下面来一一介绍：
1、键合相：
确定了正反相后基本就简单了，正相很简单，我们重点讨论下反相，C18主要分离非极性和弱极性物质，因为是键合硅胶，所以C18也分好几种有常规的如C18-A，耐纯水的OLAppleC18-AQ、耐酸碱的OLAppleC18-EX等，如果发现C18保留很弱，调整流动相也不行，这个时候可以考虑C8甚至C4等。
2、粒径：
色谱法追求的是高效、高分辨、高速等。目前来说亚2um填料或者2UM核壳填料是很理想的模型，基本具备“三高”特征尤其是高速，线速度不在影响分离度，不过附带的缺点就是高压，要升级相应的硬件，成本高昂，需要谨慎考虑。5um填料较为普遍，目前来说完全可以胜任各种日常检测，即使有特殊要求，3um色谱填料基本上也能全覆盖，不过该模型下线速度和分离度是成反比的。
3、孔径：
目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。开孔的填料多了个类似分子筛功能，所以选择孔径一定要关注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔径都很小，可以缩短样品路径。所以国际上还有无孔硅胶柱子，也很适合蛋白分离，彻底解决蛋白分子量大和太粘稠堵住孔径问题。
4、碳载量：
快速柱碳载量很低，如A家等，省时间，省溶剂，但分析部分复杂样品如中药等有点力不从心，这个时候可以考虑英国OLApple色谱柱，碳载量15~23%，碳载量数值就像河床的水草，越高代表越密集，保留样品能力越强，越有可能分离开难分离物质。
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