液相色谱仪分析中柱平衡慢的常见原因是组分在旧的或新的流动相中对柱吸附强度差异较大。要进行一种特殊的分析,或者从一种方法改为另一种方法,需要很长时间平衡。可考虑采用专用柱用于特殊的方法,不用时将柱拆下来,注满适当的溶剂或流动相,密封保管,不再做其它的分析。
1、胺改良剂
胺改良剂如三乙胺,通常加在反相或离子对流动相中,以减少样品中破性组分的拖尾。常用1mmol/L~10mmol/L的浓度,平衡时间较长。如果一开始就用高浓度的胺,可使柱很快达到平衡。
2、离子对试剂
季胺类离子对试剂,如四丁基铵离子(TBA)冲掉比较慢。用50~100倍柱体积的流动相通过柱后,酸性组分的保留仍然变化。可以的办法用中间洗液:含100mmol/L~200mmol/L缓冲液或盐的甲醇-水。显然,要最后去掉痕量的TBA,需用强流动相,加缓冲液是为了竞争在酸性硅酸基质上的TBA,产生离子交换作用。
从反相柱上洗去长链阴离子对试剂,非常慢,想要完全除去是不可能的,甚至用100%的甲醇也不行。分析阳离子溶质其保留一直不断漂移,一定要用长链离子对时,可以选用专用柱。
3、硅胶柱
用硅胶柱作正相分离,常发生保留突然改变,或增加或减少。其原因是流动相改变时相应的改变了水的含量,使硅胶柱的含水量变化。用水脱活,硅胶柱保留时间会减少很多。
4、四氢呋喃作流动相
在反相流动相中,加四氢呋喃(THF)不会影响到柱平衡。THF的性质类似于甲醇或乙腈,但对某些种类的样品也有偶然例外,如分离水溶性的维生素,从含THF变成无THF的流动相,约需半天时间才能使柱平衡,这也证实该效应对其它类别的样品的影响。
1、液相色谱仪的日常操作条件:温度:10-40℃;相对湿度<80%;可以是恒温、恒湿,远离高电干扰、高振动设备。
2、泵的保养:
(1)使用流动相尽量要清洁;
(2)进液处的沙芯过滤头要经常清洗;
(3)流动相交换时要防止结晶;
(4)避免泵内堵塞或有气泡;
3、检测器(UV)的保养:
(1)紫外灯的保养:在2小时以上不用是关闭,节省能量。
(2)样品池要冲洗、保养。
4.进样器的保养:
(1)每次分析结束后,要反复冲洗进样口,防止样品的交叉污染;
(2)平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗;如出现漏液现象,原因极可能为转子密封垫磨损或污染,一般须申请维修或更换配件。
5、色谱柱的保养:
(1)色谱柱在任何情况下不能碰撞、弯曲或强烈震动;
(2)当色谱柱和色谱仪联结时,阀件或管路一定要清洗干净;
(3)要注意流动相的脱气、PH;
(4)避免使用高粘度的溶剂作为流动相;
(5)进样样品要提纯;
(6)严格控制进样量;
(7)每天分析工作结束后,要清洗进样阀中残留的样品;
(8)每天分析测定结束后,都要用适当的溶剂来清洗柱;
(9)若分析柱长期不使用,应用适当有机溶剂保存并封闭;
6、工作站:出现死机可重起计算机;不正常运行时,首先可更换电脑测试其硬件故障;或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。
7、流动相的抽作要求:二次蒸馏水,缓冲盐一定要过滤;流动相脱气至关重要(可采用抽滤,超声波脱气等方法)。缓冲盐的使用:流动相含有盐分时,做完实验后一定要进行流路冲洗;首先用水冲洗,打开排液阀用PURG键转换出原有含盐的流动相,然后关闭排液阀打开泵冲洗全部流路45分钟以上,如此更换流动相为水和甲醇混合液冲洗全部流路30分钟(此步骤一般可省去,根据实验而论),最后更换纯甲醇冲洗全部流路45分钟以上。
8、吸滤头:特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗;清洗不成功则需要换。
9、过滤器:当色谱峰出现异常情况时,有可能是此部件被污染,拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。
10、单向阀:如遇到泵压不稳或流动相不能抽取,则可能是单向阀出现问题,卸下用异丙醇超声波清洗,清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中,切记不可与安装方向倒置超洗!
11、泵头:泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液,或更换柱塞杆及其密封垫等)
12、排液阀:此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损,可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。
高效液相色谱仪的正确安装事项如下:
1、要注意防止灰尘玷污光学元件
该仪器很多检测器都是属于光学类的分析仪器,这些光学元件很容易受到灰尘玷污,光学元件一旦被玷污,就会引起很多麻烦。与光学元件受潮后效果一样,主要是使光学元件的反射率降低,从而影响仪器的灵敏度。另外,还会使得杂散光增大,噪声增大,减低检测器的灵敏度,使得分析测试的误差增大。因此,安放本该仪器的房间要干净、通风、防尘,同时还要注意防止震动。
2、要注意防止干扰
要注意防止电、磁场的干扰。电、磁场的干扰是影响高效液相色谱仪稳定性的重要因素。一般来讲,安放该仪器的房间,应该远离电场、磁场干扰。
3、要注意防湿防潮
本仪器是光、机、电、计算机四位一体的、技术密集的高科技产品,它的每一个部分都不允许受潮。否则,将会使有关的元器件损坏或性能变坏,影响仪器的稳定性。
注:使用高效液相色谱仪时,液体待检测物被注入色谱柱,通过压力在固定相中移动,由于被测物种不同物质与固定相的相互作用不同,不同的物质顺序离开色谱柱,通过检测器得到不同的峰信号,最后通过分析比对这些信号来判断待测物所含有的物质。高效液相色谱作为一种重要的分析方法,广泛的应用于化学和生化分析中。高效液相色谱从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别,它的特点是采用了高压输液泵、高灵敏度检测器和高效微粒固定相,适于分析高沸点不易挥发、分子量大、不同极性的有机化合物。
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