高效液相色谱仪色谱柱性能的评价包括评价内容和评价方法等方面。
一、评价内容:
1、分离效能。
2、对指定溶质的选择性。
3、在不同PH值介质中的稳定性。
4、不同批次但同型号填料间性能的重现性。
5、适宜的操作压力等。
二、评价方法:
以指定的一组标准溶质为样品,测定其在色谱柱上的理论塔板数,作为柱效的衡量指标。
例:对于反相色谱填料,可以选择一组具有不同极性的芳香族化合物,如苯、萘、菲、苯、甲苯和二甲苯等作为基本组分,再加以苯酚和苯胺等酸、碱性溶质。
1、流动相的抽滤要求
色谱纯试剂,二次蒸馏水,缓冲盐一定要过滤。
2、吸滤头
特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗;清洗不成功则需要更换。
3、单向阀
如遇到泵压不稳或流动相不能抽取,则可能是单向阀出现问题,卸下用异丙醇超声波清洗,清洗时须按其安装的反相放置在小烧杯中,切记不可与安装方向倒置超洗!
4、泵头
泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液,或更换柱塞杆及其密封垫等)。
5、过滤片
当色谱峰出现异常情况时,有可能是此部件被污染,拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。
6、排液阀
此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损,可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。
7、手动进样器
平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗;如出现漏液现象,原因极可能为转子密封垫磨损或污染,一般须申请维修或更换配件。
8、流通池
在色谱峰不正常时可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗(可根据说明书进行操作或申请维修)。
9、工作站
出现死机可重启计算机;不正常运行时,首先可更换电脑测试其硬件故障;或在本机上重新插拨接口、重新安装软件。
高效液相色谱仪分析中,选择流动相时应考虑流动相与填料的作用、纯度、与检测器的匹配、粘度、对样品的溶解度和样品回收等方面。
1、流动相与填料的作用:
流动相应不改变填料的任何性质。
低交联度的离子交换树脂和排阻色谱填料有时遇到某些有机相会溶胀或收缩,从而改变色谱柱填床的性质。
碱性流动相不能用于硅胶柱系统。
酸性流动相不能用于氧化铝和氧化镁等吸附剂的柱系统。
2、纯度:
色谱柱的寿命与大量流动相通过有关,特别是当溶剂所含杂质在柱上积累时。
3、与检测器的匹配:
当使用UVD时,所用流动相在检测波长下应没有吸收或吸收很小。
当使用RID时,应选择折光系数与样品差别较大的溶剂作流动相,以提高灵敏度。
4、粘度:
高粘度溶剂会影响溶质的扩散和传质,使柱效降低,还会使柱压增加,分离时间延长。尽量选择沸点在100℃以下的流动相。
5、对样品的溶解度:如果溶解度欠佳,样品会在色谱柱内沉淀,不但影响纯化分离,而且会使色谱柱恶化。
6、样品回收:应选用挥发性溶剂。
高效液相色谱仪分析选择流动相时应注意的问题:
1.尽量使用高纯度溶剂作流动相,防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。不纯的溶剂会引起基线不稳,产生伪峰。
2.避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降和损坏色谱柱,如使固定液溶解流失和酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。
3.样品在流动相中应有适宜的溶解度,防止产生沉淀并在柱中沉积。
4.流动相粘度低(粘度适中)。若使用高粘度溶剂,会增高压力,不利于分离。常用低粘度溶剂有丙酮、甲醇和乙腈等。但粘度过低的溶剂也不宜采用,如戊烷等,它们容易在色谱柱和检测器内形成气泡,影响分离。
5.化学稳定性好。
6.流动相应满足检测器的要求。
对于紫外吸收检测器,应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长长。所谓溶剂的紫外截止波长是指当小于截止波长的辐射通过溶剂时,溶剂对此辐射产生强烈吸收,此时溶剂被看作是光学不透明的,会严重干扰组分的吸收测量。
对于示差折光检测器,要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相,以达到zui高灵敏度。
液相色谱仪,看你分离的样品的种类,看流动相是否和样品互溶,分离程度,一般加水多少,甲醇,乙腈很多种,看样品的沸点,溶解性。
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