高效液相色谱仪的工作过程：
储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。以下是总结高效液相色谱仪的的应用：
1、在食品分析中的应用
食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸（邻苯二甲酸、柠檬酸、苹果酸等）、有机胺、矿物质等；
食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂（合成色素如柠檬黄、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、亮蓝等）、抗氧化剂等；
食品污染物分析：霉菌毒素（黄曲霉毒素、黄杆菌毒素、大肠杆菌毒素等）、微量元素、多环芳烃等。
2、在环境分析中的应用
多环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药（如氨基甲酸脂类，反相色谱）残留等。
3、在生命科学中的应用
HPLC技术目前已成为生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。其在生化领域的应用主要集中于两个方面：
低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。
高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、干扰素等）的纯化、分离和测定。
4、在医学检验中的应用
体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床药物监测：
合成药物：抗生素、抗忧郁药物（冬眠灵、氯丙咪嗪、安定、利眠宁、苯巴比妥等）、黄胺类药等。
天然药物生物碱（吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、强心甙）等
1、流动相的要求：
高效液相级色谱醇，二次蒸馏水，缓冲盐一定要过滤；流动相脱气至关重要(可采用抽滤，超声波脱气等方法)
2、吸滤头：
特殊情况下可拆下滤头抽取以判断其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流动相通过吸滤头打出以判断其是否堵塞。若有堵塞情况可用异丙醇超声波清洗；清洗不成功则需要更换。
3、单向阀：
如遇到泵压不稳或流动相不能抽取，则可能是单向阀出现问题，卸下用异丙醇超声波清洗，清洗时须按其安装的方向放置在小烧杯中，切记不可与安装方向倒置超洗！
4、泵头：
泵头漏液或出现其它故障一般要申请维修(如漏液，或更换柱塞杆及其密封垫等)
5、过滤器：
当色谱峰出现异常情况时，有可能是此部件被污染，拆下用异丙醇超洗或更换过滤垫片。
6、排液阀：
此处不能完全密封或漏液时一般是其中的垫片污染或磨损，可卸下后取出其垫片用异丙醇超声波清洗或更换垫圈。
7、手动进样器：
平时应注意用二次蒸馏水和甲醇在装载状态及进样分析状态清洗；如出现漏液现象，原因极可能为转子密封垫磨损或污染，一般须申请维修或更换配件。
8、流通池：
在色谱峰不正常时会可能是此部件补污染。可拆卸后取出其中的垫片用异丙醇超洗(可根据说明书进行操作或申请维修)。
9、工作站：
出现死机可重起计算机；不正常运行时，首先可更换电脑测试其硬件故障；或在本机上重新插拔接口、重新安装软件。
高效液相色谱仪也叫高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱等，它是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱。又因分析速度快而称为高速液相色谱。
由于液相色谱分析技术涉及的样品种类繁多、样品组成及其浓度复杂，样品物理形态多变，对液相色谱仪的正常分析测定造成一些干扰因素，如果不注意仪器的维护和保养，会对日常的分析测定带采不便，所以需要对仪器的使用以及维护要做一些了解才能熟练掌握这种分析技术。
高效液相色谱仪的操作过程：
1、翻开HPLC工作站（包含计算机软件和色谱仪），衔接好活动相管道，衔接检测体系。
2、对抽滤后的活动相进行超声脱气10-20分钟。
3、过滤活动相，根据需求挑选不一样的滤膜。
4进入HPLC操控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5、有一段时刻没用，或许换了新的活动相，需求先冲刷泵和进样阀。冲刷泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲刷进样阀，需求在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲刷时速度不要超越10ml/min。
6、调理流量，初度运用新的活动相，能够先试一下压力，流速越大，压力越大，通常不要超越2000。点击injure，选用适宜的流速，点击on，走基线，调查基线的状况。
7、规划走样办法。点击file，选择select?users?and?methods，能够选择现有的各种走样办法。若需树立一个新的办法，点击new?method。选择需求的配件，包含进样阀，泵，检测器等，根据需求而不一样。选完后，点击protocol。一个完整的走样办法需求包含：a、进样前的稳流，通常2-5分钟；b、基线归零；c、进样阀的loading-inject变换；d、走样时刻，随不一样的样品而不一样。
8、进样和进样后操作。选定走样办法，点击start。进样，一切的样品均需过滤。办法走完后，点击postrun，可记载数据和做符号等。悉数样品走完后，再用上面的办法走一段基线，洗掉剩余物。
9、关机时，先关计算机，再关液相色谱仪。
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