在使用高效液相的过程中,管路的堵塞是常发生的故障之一。下文为您介绍液相色谱管路堵塞的原因与解决方法。
液相色谱管路阻塞的原因:
1、没有很好过滤流动相;
2、样品中有微粒;
3、泵或进样器垫圈产生碎片;
4、预柱、护柱和分析柱中漏出填料;
5,毛刺和锉屑进入;
6、流动相中的结晶盐;
7、微生物
8、系统中进入了其它颗粒性物质。
液相色谱管路阻塞解决方法:
系统中管路阻塞的现象很少见,常见的是烧结过滤片(玻璃砂芯)阻塞。用烧结过滤器或过滤片(孔径2-10um)能去掉阻塞管路的微粒(如0、25mm管径)。用系统分段法检查阻塞的管路,从后向前分别松开接头检查,找到阻塞管路后,应立即拆下来疏导或换新。
如果是非刚性物质阻塞,如生物样品中的生化物质(蛋白质)、微生物等,可用极细的金属丝导通,也可以在火头上烧一烧,使有机物炭化,而后再导通。
如果是刚性物质阻塞,要导通则十分困难,采用反冲的办法有时能成功。就是将管子调头用泵冲洗。操作时要注意保护眼睛和裸露的皮肤,因阻塞物会以很高的速度冲出来。无法导通的管路要换上同样规格的管子。如果换上新管后又被阻塞,则应该停机检查上面提到的引起阻塞的几种原因。
液相色谱柱是液相色谱仪的核心部件,且极易因使用不当而损坏,不互溶的流动相,不正确的保存方式及清洗都会降低色谱柱的使用寿命。因此液相色谱柱的日常维护保养极为重要。
1.流动方向已明确标明在色谱柱上,请正确安装色谱柱,除非您想冲洗色谱柱入口的污染物,否则,请不要反接色谱柱。
2.反相柱做完实验后,若使用流动相中含有缓冲溶液盐,请在使用完毕后用不含缓冲剂的80%水-有机溶剂流动相冲洗色谱柱,后换成100%有机溶剂贮存。
3.正相色谱柱正相使用保存在纯正己烷中,反相使用时需要将柱内贮存液用异丙醇置换。
4.流动相与样品在使用前可以用0.45um的微孔滤膜或用预处理柱(SPE固相萃取小柱)进行预处理,并严格脱气。
5.流动相pH需保持在2-8之间,请尽量不超过适用范围。
6.柱温不要大于60℃。
7.压力最高不超过30Mpa,建议在20Mpa以内使用。
8.使用新鲜溶剂,防止细菌增长。
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