HPLC液相色谱柱柱压升高原因 ——格莱普鼎力相助
格莱精密公司(http://www.chem17.com/st201773)是专业从事制备色谱设备的研发、制造、销售为一体的科技性企业。经营产品为各型号制备型HPLC纯化系统。包括泵系统、检测器系统和制备柱系统。公司凭借多年的努力在国内制备液相色谱行业中异军突起，受到广大客户的一致信任。
色谱柱是液相色谱的心脏，在液相色谱仪的使用中，保持色谱柱的柱效、容量和渗透性，延长柱子的使用寿命非常重要。色谱柱压升高一般是由于柱床内产生了杂质，造成流体阻力加大所致。格莱普多年从事色谱行业，积累了一些经验，您可按照以下建议，逐项排除原因：
1、流动相的前处理 。杂质堵塞色谱柱进口滤片，导致压力升高。这往往是由于流动相没有过滤，或虽已过滤但过滤不彻底，使固体杂质滞留于滤板上所造成的。
2、样品的沉淀 。当溶解样品的溶剂与流动相不一致时，样品进入色谱柱，有时可能因溶解度降低而沉淀出来，造成压力升高。
3、晶体的析出 。使用含有缓冲液的流动相时，缓冲液中的无机盐可能会残留在体系之中，它们会因在新流动相中的溶解度降低而析出，造成流体阻力加大、压力升高。
4、细菌或霉菌孳生 。霉菌在流动相中、管路中或柱子进口处繁殖、生长而堵塞滤板，导致压力升高。所以在使用磷酸盐缓冲液时一般要现配现用。
5、溶质吸附 。当溶质在柱子上有较强的吸附，且所用的流动相难以将它们洗脱时，累积的未洗脱溶质也会造成阻力增大和压力升高。
6、流动相更换过度较快 。当改变流动相体系时，不彻底的更换使不同性质、互不混溶的流动相存在于同一个体系之中，也会造成压力升高。
如果您在实验中或者是在选购色谱柱等仪器耗材方面遇到问题，可随时与我公司（），我公司必竭诚为您服务，帮你排忧解难。
成都格莱普
2014-4-11
选购一台品质优良的液相色谱仪应从以下几个方面考虑：
首先是如何看指标。液相色谱仪的指标很多，有泵的、检测器的、色谱柱等等。我们认为要看主要技术指标，根据国家标准，仪器的主要指标有噪音，漂移，最小检测浓 度，定性定量重复性等。这些指标都要放在系统，回路里去看，去比较。就是需要把各单元装置都要联接好，如接好色谱柱，进样阀，并且要通上流动相。因为您在 分析中也都是联接好以后才可以进行分析的，而不是单单用个检测器或是泵的。
然后在这个基础上，我们再去比较这些主要指标。
1.噪音
是指由仪器的电器元件、温度波动、电压的线性脉冲以及其他非溶质作用产生的高频噪声和基线的无规则波动。噪音的大小直接关系到仪器的检测灵敏度，噪音越 大，检测的灵敏度就越低。对于检测低含量的样品就要求仪器的噪音越小越好，否则噪音过大将会导致基线不稳，甚至影响分析结果。
2.漂移
是指仪器稳定后一段时间内基线漂离原点的距离，通常用来衡量仪器稳定快慢。高品质的仪器能在较短的时间内达到稳定，从而在一定程度上提高了分析效率。
3.定性定量重复性
主要是考核仪器稳定性的指标，这对于分析样品来说是非常重要的。好的仪器其稳定性应该是十分优秀的，这就要求多次进样保留时间及含量的一致性，这样做出来的结果才能使人信服。
4.最小检测浓度(最小检测限)
最小检测限是反映仪器灵敏度的重要参数。CL=2NdC/H(CL ：最小检测浓度 Nd:噪音 C：样品浓度最小检测浓度 H：样品峰高)由上式可见，最小检测浓度是和噪音成正比的，噪音越大，最小检测浓度就越大，灵敏度就越低。某些厂家回避了这个指标，说明他们不愿在最小检 测浓度的基础上去比较噪音。
液相色谱仪利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。一般问题主要有以下几种；
气泡溢出
流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开purg键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相，无论打开purge键几次，都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。
柱压高
⑴缓冲液盐分如（乙酸铵等）沉积于柱内；
⑵样品污染沉积。
处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟；对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
无指示
⑴泵密封垫圈磨损；
⑵大量气泡进入泵体。
处理对于第一种情况，更换密封垫圈；对于第二种情况，在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
不稳定
原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
峰分叉
⑴色谱柱被污染；
⑵柱头填料塌陷。
处理对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定），再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分（污染的填料），装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。
重复性差
⑴进样阀漏液；
⑵加样针不到位；
⑶液量不足。
处理对于第一种情况更换进样阀垫圈；对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要，注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液，每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积；样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质，完全溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞；色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
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