故障现象:
峰展宽
可能的原因:
(1)进样体积过大
(2) 柱外体积过大
(3) 流动相粘度过高
(4) 保留时间过长
(5)样品超载
(6)缓冲液溶度太低
(7)保护柱污染或失效
(8)色谱柱污染或失效,柱效太低
(9)呈现两个或多个未被完全分离的峰
(10)柱温过低
YL9100液相色谱仪
排除方法:
(1)减小进样体积
(2)检查各接头处的连接,避免死体积形成
(3)增加柱温,采用低粘度流动相
(4)等度洗脱时增加强溶剂浓度,或采用梯度洗脱
(5)稀释样品,或采用小体积进样
(6)增加浓度
(7)更换保护柱
(8)清洗或更换色谱柱
(9)选择其他色谱柱改善分离效果
(10)适当提高柱温
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贮液装置、高压输液泵、过滤器、脱气装置等
1. 贮液器:贮液器用于存放溶剂。溶剂必须很纯,贮液器材料要耐腐蚀,对溶剂呈惰性。贮液器应配有溶剂过滤器,以防止活动相中的颗粒进进泵内。溶剂过滤器一般用耐腐蚀的镍合金制成,空隙大小一般为2mm。
2. 脱气装置:脱气的目的是为了防止活动相从高压柱内流出时,开释出气泡进进检测器而使噪声剧增,甚至不能正常检测。
3. 高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪的重要部件,是驱动溶剂和样品通过色谱柱和检测系统的高压源,其性能好坏直接影响分析结果的可靠性。
对高压泵的基本要求是:
①流量稳定;②输出压力高,最高输出压力为50Mpa;③流量范围宽,可在0.01~10ml/min范围任选。④耐酸、碱、缓冲液腐蚀。⑤压力波动小。
2. 梯度洗脱装置 梯度洗脱是利用两种或两种以上的溶剂,按照一定时间程序连续或阶段地改变配比浓度,以达到改变活动相极性、离子强度或pH值,从而进步洗脱能力,改善分离的一种有效方法。当一个样品混合物的容量因子是范围很宽,用等度洗脱时间太长,且后出的峰形扁平不便检测时,用梯度洗脱可以改善峰形、并缩短分离时间。HPLC的梯度洗脱与GC的程序升温相似,可以缩短分析时间,进步分离效果。使所有的峰都处于较佳分离状态,而且峰形尖而窄。
二. 进样器
进样器一般要求密封性好,死体积小,重复性好,保证中心进样,进样时对色谱系统的压力和流量波动小,并便于实现自动化。
高压进样阀是目前广泛采用的一种方式。阀的种类很多,有六通阀、四通阀,双路阀等。以六通进样阀较为常用。
三.分离系统
色谱分离系统包括色谱柱、固定相和活动相。色谱柱是其核心部分,柱应具备耐高压、耐腐蚀、抗氧化、密封不漏液和柱内死体积小、柱效高、柱容量大、分析速度快、柱寿命长的要求。通常采用优质不锈钢管制成。
色谱柱按内径不同可分为常规柱、快速柱和微量柱三类。
常规分析柱柱长一般为10~25cm,内径4 ~ 5mm,固定相颗粒直径为 5 ~ 10 mm。为了保护分析柱不受污染,一般在分析柱前加一短柱,约数厘米长,称为保护柱。
(微量分析柱内径小于l mm,凝胶色谱往内径3~12 mm,制备往内径较大,可达25 mm以上。)
四. 检测系统
检测器的作用是将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号,常用检测器有紫外吸收、荧光、示差折光、化学发光等。
液相色谱柱是液相色谱仪的核心部件,且极易因使用不当而损坏,不互溶的流动相,不正确的保存方式及清洗都会降低色谱柱的使用寿命。因此液相色谱柱的日常维护保养极为重要。
1.流动方向已明确标明在色谱柱上,请正确安装色谱柱,除非您想冲洗色谱柱入口的污染物,否则,请不要反接色谱柱。
2.反相柱做完实验后,若使用流动相中含有缓冲溶液盐,请在使用完毕后用不含缓冲剂的80%水-有机溶剂流动相冲洗色谱柱,后换成100%有机溶剂贮存。
3.正相色谱柱正相使用保存在纯正己烷中,反相使用时需要将柱内贮存液用异丙醇置换。
4.流动相与样品在使用前可以用0.45um的微孔滤膜或用预处理柱(SPE固相萃取小柱)进行预处理,并严格脱气。
5.流动相pH需保持在2-8之间,请尽量不超过适用范围。
6.柱温不要大于60℃。
7.压力最高不超过30Mpa,建议在20Mpa以内使用。
8.使用新鲜溶剂,防止细菌增长。
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