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色谱柱清洗方法及技术交流

时间:2020-05-10    来源:仪多多仪器网    作者:仪多多商城     
  吸附的主要原因
 
  反相硅胶柱填充介质(固定相)与样品间常常会发生下列吸附现象:
 
  (1) 残存硅醇基与碱性物质间的离子吸附;(2) 硅胶表面的金属杂质与金属配位物质间的吸附;
 
  (3) 疏水性极强的物质在柱中的蓄积。以上现象,会引起反相色谱柱柱效下降、拖尾、重复性不良等状况的发生
 
  清洗方法
 
  1、疏水性物质的去除:使用有机溶剂(乙腈、甲醇、乙腈与THF的混合溶剂)进行清洗。 考虑样品成分对于有机溶剂的溶解性,选用比淋洗液浓度高的有机溶剂、或选用极性较低的有机溶剂进行过柱清洗。这种情况下,有必要注意淋洗液中盐的析出现象。
 
  2、碱性物质(金属配位物质)的去除:使用酸性水溶液与有机溶剂的混合液(0.1%磷酸、0.1%TFA/乙腈、甲醇的混合液)进行过柱清洗。
 
  *一般来说,清洗时间可选择为过柱5-10个柱体积便可。
 
  在附吸成分其吸附力极强时,即使进行过清洗,柱性能也有可能得
 
  不到恢复。另外,请充分考虑淋洗液的pH值,以避免损坏色谱柱。

液相色谱柱的结构说明

  液相色谱柱的结构:

  1、空柱由柱接头、柱管及滤片组装而成。

  柱接头采用低死体积结构,柱接头是两端螺纹组件,一端是为7/16英寸外螺纹,另一端是3/16英寸的内螺纹(国内外已规范化)。7/16英寸外螺纹与1/4英寸柱管(Φ6.35mm)连接,中间放置压坏用于密封。3/16英寸的内螺纹与1/16英寸(Φ1.57mm)的连接管连接,中间也放置压环用于柱接头的密封。为了尽量减少柱外死体积,在安装色谱柱时,用Φ1.57mm连接管通过空心螺钉压环后要尽量插到底,然后再拧紧空心螺钉。压环被空心螺钉挤压变形后紧箍在连接管上(连接管通过压环后露出的管长度应严格控制在2.5mm长或其他固定尺寸)。

  在两端柱接头内,柱管两端各放置一片不锈钢滤片(或滤网),用于封堵柱填料不被流动相冲出柱外而流失。空柱各组件均为316#不锈钢材质,能耐受一般的溶剂作用。但由于含氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。

  2、柱填料:

  液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的,柱子的分类是依据填料类型而定。

  正相柱:多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种,其颗粒直径在3—10?m的范围内。另一类正相填料是硅胶表面键合—CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。

  反相柱:主要是以硅胶为基质,在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的非极性填料。也有无定型和球型之分。

  常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等,其颗粒粒径在3—10?m之间。

  

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液相色谱柱日常该如何维护?

  液相色谱柱是一种用于液体色谱分析仪器
  液相色谱柱的日常维护:
  1、每次开机时,流速和柱压要逐渐增加,突然迅速增加,会使柱床受到冲击,引起紊乱,产生空隙
  2、在进样前使色谱系统充分平衡,是否平衡可由基线加以判断
  3、在进样前,检查色谱系统的各个接头,通常由此能发现是否有漏液现象。如有漏液,空气会从漏缝进入系统引起基线漂移,影响峰高和峰面积的重复性
  4、不要把柱接头上得太紧,否则易损坏接头螺纹,引起渗漏
  5、不要把柱子放在有气流的地方或直接放到阳光下,气流和阳光都会使柱子产生温度梯度造成基线漂移;如果怀疑基线漂移是由温度梯度引起的,可以设法使柱子恒温
  6、若仪器用做常规分析,样品种类有限,但分析次数很多,则不妨为每一类常规分析配置一根专用柱,这样有助于延长柱寿命
  7、如果怀疑样品会污染色谱柱,可以用合适的溶剂几百毫升、慢慢冲洗柱子过夜,第二天早晨再用流动相重新平衡柱子约3min、
  8、在因装卸、更换、贮存等而挪动柱子时,动作要轻,不要使其受到碰撞,以免柱床因震动产生空隙或通道
  9、柱要加标签,新旧分开,不要放在温度变化很大的地方
  10、液相色谱柱柱子不用或贮藏时,应封闭并贮存在惰性溶剂中

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