高效液相色谱仪是进行定量分析，杂质检查等分析工作中主要的精密仪器，色谱柱是液相色谱仪的zui核心部件。
在这里，介绍一下色谱柱使用中的注意事项及使用心得。
1、柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配
色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多，如果接头和柱头深度匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。
接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。
2、溶剂的匹配转换
色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。
特别是流动村j含缓冲盐时，如保存溶剂足纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接人使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，造成柱头堵塞。建议仪器和色谱柱经常使用，用10％的有机溶剂保持即可。
3、流动相及待测样品的过滤
日常分析工作中，我们使用的流动栩和待测样品应用0．45pm滤膜过滤后再连接或注入到色谱仪上。
对于有机相比例高的流动栩可以一起过滤出来备用，但是有机相比例小的流动相一定要现用现滤，分析结束时一定要先用10％的有机溶剂冲洗管路及色谱柱，为有机相少的流动相容易滋生细菌，造成色谱柱堵寒，影响色谱柱性能。
4、色谱柱分析时应进行平衡和老化
进行的方法是运行几次完整的分析程序(包括进样)，直到观察到峰形、保留时间和峰面积稳定为止。对某些特定的待测物，如分子量大于1000的，闪扩散速度慢，老化时间相应要长，可采取大浓度进样或在同一个洗脱周期内连续进样多针的方式加快老化。
5、pH使用范围
一般认为硅胶基质柱子的pH使用范足2-8，如果选用的是高品质硅胶，加上高密度键合和双封尾，使pH耐受范同zui大提高到lO。
注射用头孢拉定流动村1pH值为8，对色谱柱伤害很大，需要选择pH值耐受性高的色谱柱。
6、峰形异常
峰形对称性的优劣对峰面积和分离度有很大的影响，从而影响分析结果的准确性。先检查样品足否过载，由于样品过载引起的峰形后拖不能通过改变色谱条件消除。
如果发现过载，需降低进样量(包括进样体积或浓度)，进样量越小，峰形越好，例子如头孢尼西钠的测定。其次，硅醇基次级保留引起部分峰拖尾。
这种情况发生，选择高密键合和彻底的双蜂尾工艺的色谱柱能改善峰形。另外，溶解样品的溶剂洗脱能力比流动相强会发生峰前延，所以样品zui好选用流动相溶解。
7、色谱柱保存
短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流动相(不含缓冲盐)保存为佳，以尽量减少下次使用的平衡时间。
一般只建议在长期保存反相柱的时候用纯醇或乙腈，使用80％左右有机相保存也属好的选择，且足以避免长菌。
强烈建议在柱身上贴标签标明保存溶剂。离子交换柱和水性凝胶柱等适合保存在水溶液中的色谱柱，可加0．05％化钠溶液防止K菌。正相柱无论是短期还足长期，都推荐保存住所用流动相巾。
聚合物基质色谱柱具有相当强的硬度，有无孔和有孔两种规格。该固定相中含有苯基官能团，可与待测物发生疏水相互作用。
与硅胶基质的反相填料相比，PolyRP固定相的一个显著优点是可以在极端pH（1-14）条件下使用，尽管分离效率略有降低。它具有相当强的硬度，有无孔和有孔两种规格。
该固定相中含有苯基官能团，可与待测物发生疏水相互作用。与硅胶基质的反相填料相比，PolyRP固定相的一个显著优点是可以在极端pH（1-14）条件下使用，尽管分离效率略有降低。
聚合物基质色谱柱的安装：
a、拆开柱包装盒，确认色谱柱的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。
b、拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。
c、按柱管上标示的流动相流向，将聚合物基质色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接(如条件允许，建议在柱前使用保护柱)；柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57mm、内径为0.1-0.3mm的不锈钢管。
在接管时一定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止，切记不要用力过大。如聚合物基质色谱柱通过流动相加压后有漏液现象，请用扳手继续顺时针拧1／4圈，直至不漏液为止。
聚合物基质色谱柱主要基质的特点：
a.硅胶
硅胶是陶瓷性质的无机物基质，刚性大，不易变形。
化学性质较稳定，但对于水溶液尤其碱性水溶液仍然是不稳定的，即使表面经过良好的化学键合，覆盖了固定液，还是要注意水、碱性溶液、酸性溶液对硅胶的溶解作用，基质或者说是柱床(packedbed)溶解对色谱柱的影响是致命的。
以聚合物基质色谱柱的填料构成了目前绝大多数的色谱柱填料。纯硅胶填料适宜分离溶于有机溶剂的极性、弱极性的非强离解型的化合物，硅胶也可以做凝胶色谱但柱效较低。
聚合物基质色谱柱键合固定相的高压液相填料，有其他填料无法比拟的高分离效能。
b.二氧化铝
二氧化铝和硅胶相似，但对水溶液、酸性碱性水溶液溶液更加不稳定。所以，极少用作键合固定相的基质，也是适宜分离溶于有机溶剂的极性、弱极性的非强离解型的化合物，尤其是分离芳香族碳氢化合物。酸性易离解的化合物容易在二氧化铝上形成死吸附。另外，氧化铝分离几何异构体能力优于硅胶。
c.聚合物填料
聚合物基质色谱柱受压会变形，压力限度低但pH使用范围宽。苯乙烯-二乙烯苯基质疏水性强，使用任何流动相，在整个pH范围内稳定，可以用强酸、强碱来清洗色谱柱。甲基丙烯酸酯基质比苯乙烯-二乙烯苯疏水性更强，但可以通过适当的功能基修饰变成亲水性的。
由于不耐压、有溶胀性，所以聚合物填料适宜用于大分子像蛋白质或合成的高聚物，另外还可以制成分子排阻、离子交换柱。大孔树脂实际上主体就是苯乙烯-二乙烯苯聚合物或类似的合成高聚物。
聚合物基质色谱柱广泛用于各种不同基质中糖分子、糖醇和其他水溶性物质的分离。可以用来分析有机酸及利巴韦林等物质，可以用来分离树胶醛糖、阿糖醇等糖类。
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