高效液相色谱仪（HPLC）现已成为有机化学分析的重要手段之一。同样，在食品分析中，无论是残留分析还是成分分析，HPLC也已成为不可或缺的分析仪器。和其它分析仪器一样，你若想让HPLC很好地为你工作、得到可靠的数据，首先你要保养好它，使它处于一个良好的待机状态，这样你操作它进行分析时就可以比较顺利地获得理想的结果。 流动相脱气对于避免HPLC系统出问题，顺利得到一个理想的数据是一个很有效的措施。HPLC系统内是不能够有气泡存在的。HPLC泵在输送液体时要产生很大的压力，由于气体的压缩比与液体相比大的多，因而当气泡存在时，你将观察到瞬间的流速降低和系统压力下降。如果这个气泡足够大，液相泵将不能输送任何溶剂，而且如果压力低于预先设定的压力低限，泵将停止工作。有些泵设计可以很好地排除气泡，而也有一些泵设计当气泡存在时将停止运转。 常用的脱气方法有如下几种： 1、吹氦脱气法。 利用氦气在液体中溶解度比空气低的特性，在0.1MPa压力下，以约60 mL/min流速通入流动相储液容器中10～15min，可以很有效地从流动相中排除溶解的空气，能排除接近80%的氧气。采用一个高效分布式喷射流装置，一体积的氦气可从流动相中将等体积的几乎全部气体排除。这意味着1L氦气通过1L流动相就可完成排气这个工作。这种脱气方法虽然好，但我们国内氦气价格较高，很少有实验室采用此方法。 2、加热回流法。 此法的脱气效果较好。在操作时要注意冷凝塔的冷却效率，否则溶剂会丢失，混合流动相的比例会有变化。 3、抽真空脱气法。 此法可使用真空泵，降压至0.05～0.07MPa即可除去溶解的气体。但是由于真空脱气会使混合溶剂组成发生变化，从而影响到实验的重现性，因此多用于单溶剂体系的简单分析。 4、超声波脱气法。 将欲脱气的流动相置于超声波清洗器中，用超声波震荡10～20min。此法的脱气效果最差。 5、在线脱气法。 现在商品的HPLC仪器，均可配在线脱气机。在线脱气使用简单，低故障，有效。建议购买仪器时一定要购买，有的公司是作为选购件，所以与仪器公司谈配置时应与公司确认。
高效液相色谱仪适宜于分离、分析高沸点、热稳定性差、有生理活性及相对分子量比较大的物质，因而广泛为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中针对这种精密而又运用广泛的科学仪器。
下面我们来聊一聊基线。HPLC常见的基线问题主要有基线漂移以及基线噪音。
基线漂移
线漂移基线漂移是色谱工作者普遍遇到的问题。一般说来，机器刚起动时，基线容易漂移，大概要30min的平衡时间，如果用了缓冲溶液、缓冲盐，或者在低波长下(220nm)平衡时间相对会比较长，仍然发现基线漂移，原因可能有以下几种：
1、柱温波动
控制好柱子和流动相的温度，检查是否有打开的窗户或空调对着柱温箱。
2、流通池被污染或有气体
用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池(尽量断开柱子)。如有需要，可以用1N的硝酸(不要用盐酸)。
3、紫外灯能量不足
更换新的紫外灯
4、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成。检查流动相的组成，使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂。
基线噪音
对于紫外检测器,氘灯光源打开后要预热30min以上,基线才能稳定。噪声是指与被测物无关的检测器输出信号的随机扰动变化,分短期噪声和长期噪声两种。
基线噪音(规则的)
产生基线噪音的原因有：在流动相、检测器或泵中有空气;漏液;流动相混合不完全;温度影响(柱温过高,检测器未加热);在同一条线上有其他电子设备;泵振动。
了避免基线噪音,在正式进样之前,需要对流动相脱气;冲洗系统以除去检测器或泵中的空气;检查管路接头是否松动;泵是否漏液;是否有盐析出和不正常的噪音,如有必要,更换泵密封;用手摇动使溶剂混合均匀或使用低粘度的溶剂减少差异或加上热交换器;有其他电子设备时断开LC、检测器和记录仪,检查干扰是否来自于外部,加以更正;泵振动时在系统中加入脉冲阻尼器。
基线噪音(不规则的)
(1)漏液：检查接头是否松动,泵是否漏液,是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要,更换密封,检查流通池是否漏液。
(2)流动相污染、变质或由低质溶剂配成：检查流动相的组成。
(3)流动相各溶剂不相溶：选择互溶的流动相。
(4)检测器/记录仪电子元件的问题：断开检测器和记录仪的电源,检查并更正。
(5)系统内有气泡：用强极性溶液清洗系统;检测器内有气泡,清洗检测器,在检测器后面安装背景压力调节器。
(6)流通池污染(即使是极少的污染物也会产生噪音):用硝酸清洗流通池;
(7)检测器灯能量时不足更换灯;
(8)色谱柱填料流失或阻塞:更换色谱柱。
(9)流动相混合不均匀或混合器工作不正常:维修或更换混合器,在流动相不走梯度时,不建议使用泵的混合装置。
高效液相色谱仪操作步骤如下：
1)过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜.
2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)进入hplc控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
6)调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
7)设计走样方法。
8)进样和进样后操作。
9)关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)填写登记本，由负责人签字。
11)流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
12)柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
13)所有过柱子的液体均需严格的过滤。
14)压力不能太大，可以不要超过2000psi。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
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