紫外分光光度计的选择因素 光度计是如何工作的

    紫外分光光度计是实验室普及率很高的一种光谱仪器，由于灵敏度高、选择性好、准确度高、适用浓度范围广，而且分析成本低、操作简便、快速得到广泛的应用，长期在分析领域扮演很重要的角色。

    在选择这类仪器时要考虑哪些因素呢？

    1、光学构造（OPTICALCONFIGURATION）

    一般来说，紫外光分光光度计分为单光束和双光束两类。顾名思义，单光束型主要是依赖单束光进行测量。一束给定波长的光通过对照物，然后再通过实际样品溶液，就能得到吸光结果。

    双光束型则是通过一个斩光轮（mirroredchopperwheel）将一束光分成两束，分别测量对照样品和实际样品。

    可以最小化光漂移（lampdrift）和减少测量时间。一些双光型光度计不利用斩光轮，而是利用一种光束分光器来代替，将一束光分成两束平行的光然后同时测量对照样品和目的样品。

    因为增加了测量的速度，所以双光束分光光度计在测量一些溶液随时间动态变化的研究中大有用处。

    2、光源和检测方法（LIGHTSOURCESANDDETECTION）

    分光光度计的光谱也是需要考虑的一个重要因素。实验室研究人员希望省钱购入专门仪器定量核酸、蛋白或者细菌的生长情况。

    例如AmershamBiosciencesofPiscataway公司的GeneQuantII能在230、260、280、320、595和600nm的波长下测量样品。果果需要更大的灵活性，研究者可以考虑一种更高性能的宽光谱仪器，可以程序性地进行ELISAs分析和比色分析。

    紫外分光光度计一般覆盖190nm和380nm波长，通常利用氘灯照明。一些特殊的仪器可以提供满足光子学和半导体研究需要的光谱范围。

    VarianofPaloAlto公司的CaryDeepUV和HitachiHighTechnologiesofTokyo的U-7000AutomatedVacuumUVSystem就是这样的仪器。

    一些仪器具有多种光源供选择：

    紫外光、可见光和甚至红外光（780nm至3,000nm）。钨灯和卤素灯一般只覆盖可见光部分（大约380nm到800nm）。而氙灯则可以覆盖紫外光和可见光区域。

    分光光度计的带宽（bandwidth）很大程度上依赖于单色仪的狭缝的宽度。可以投射出实验精确要求的光谱。

    一种严格带宽使得仪器能对复杂的混合物进行高分辨率的吸光测量。可变的单色仪的狭缝宽度能使一台分光光度计满足多种实验需要。

    为了测量吸光值，分光光度计制造商通常使用光电倍增管（photo-multipliertubes，PMTs）和光敏二极管。

    PMTs提供快速的反应时间和良好的灵敏度，并且可以在紫外光谱调节至特定的范围。但一些制造商依赖于光敏二极管的动态范围在数秒内行使所有的光谱测量。

    3、样品类型（SAMPLEFORMAT）

    在大部分的样品类型中，分光光度计可接受样品孔、小玻璃管cuvette、吸浆管和微孔板。微孔板主要是满足高通量的需要和大规模的实验室需求。

    但尽管对于小实验室来说，制造商仍然提供了多种容器转换器来满足通量的要求和减少实验时间。

    用小试管cuvette装样品容量一般从1μl-5ml，并且一些仪器装备了各种样品固定物来满足各种改变需要。体现了柔韧性。

    4、数据管理（DATAMANAGEMENT）

    大部分单机型的分光光度计包含了驱动仪器运行和管理数据的软件。高性能的仪器，通常与PC机一起联用，需要从制造商提供额外的软件。同时用户也可以选择升级软件以满足他们的需要。

    另外一个值得考虑的因素是数据的最终使用。各独立实验室都有各自感兴趣的实验结果。

    例如一些药物机构需要考虑美国FDA的要求和欧联盟的药物评价机构的要求选择不同的数据处理方式。