Agilent液相色谱仪标准操作程序
1.目的：建立一个液相色谱的标准操作程序。
2.范围：适用于Agilent液相的使用。
3.责任：使用Agilent液相的化验员。
4.程序
4.1工作环境
实验室温度为20～27℃，温度变化<3℃/hr，相对湿度<80%，液相色谱仪工作台，长2米、宽0.8米、承重大于80公斤，离墙距离0.3米以上。单相交流220V，（+5%～10%），50～60Hz，有单独的良好接地。配置稳压电源，功率大于2.5千瓦。
4.2使用前的准备
4.2.1二次蒸馏水，（建议用0.45微米水相滤膜过滤）；甲醇或乙晴（色谱纯），（建议用0.45微米有机相滤膜过滤）；其他样品所需流动相，（都需经过0.45微米滤膜过滤）。将上述溶剂放入超声波池，除去气泡，方可使用。
4.2.2把流动相放入溶剂瓶中，打开purge阀，单击pump图标，出现参数设定菜单，单击setup选项，进入pump编辑画面，设flow：5ml/min，单击OK；单击pump图标，出现参数设定菜单，单击pump control选项，选中ON，单击OK，则系统开始purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续purge，直到所有要用通道无气泡为止；单击pump图标，出现参数设定菜单，单击setup选项，进入pump编辑画面，设flow：1.0ml/min，关闭purge valve。单击pump下的的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入阻止分析和关泵的体积，单击OK。
4.2.3进行样品前处理（稀释或溶解至所需浓度）。
4.3实验步骤
4.3.1准备
4.3.1.1开启Agilent 1100LC各模块电源。
4.3.1.2打开计算机，双击online图标。
4.3.1.3从"view"菜单中选择"method and run control"画面，单击"view"菜单中的"show top toolbar","show status toolbar","system diagram","sampling diagram"使其命令前有"√"标志。
4.3.2数据采集方法编辑
4.3.2.1从“method"菜单中选择"edit entire method"项，选中除"data analysis"外的三项，单击OK，进入下一画面。
4.3.2.2在"method comments"中加入方法的信息（如This is for test!），单击OK进入下一画面。
4.3.2.3泵参数设定
在"flow"处输入流量1ml/min，在"solvent"处输入流动相中各溶剂所占的比例，也可"insert"一行"timetable",编辑梯度。在"pressure limits max"处输入柱子的zui大耐高压，以保护柱子，单击OK进入下一画面。
4.3.2.4柱温箱参数设定
在"temperature"下面的方框内输入所需的温度，并选中它点击"more>>"键，如图所示，选中"same as left"使柱温箱的温度左右一致，点击OK进入下一画面。
4.3.2.5 VWD检测器参数设定
在"wavelength"下方的空白处输入所需的检测波长，在"peak width(response time)"下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如>0.1min 。 在"timetable"中可以"insert"一行，可以输入随时间切换的波长。
4.3.2.6在"run time checklist"中，选中"data acquisition"，单击OK。
4.3.2.7单击“method"菜单，选中"save method as"，输入一方法名，单击OK。
4.3.2.8从"run control"菜单中选择"sample info"选项，输入操作者姓名，在"data file"中选择"manual"或"prefix"。
4.3.2.9从"instrument"菜单中，选择"system on"。
4.3.2.10单击OK，等仪器ready，基线平稳，从"method"菜单中选择"run method"，进样。
4.3.2.11进样时，阀门位置处于"inject"位置，进样针取样量应为所规定体积的三倍，用滤纸拭净针头表面残留液，进样时要轻而快，进样完毕应快速将阀门搬至"load"位置，进样完毕，数分钟后将进样针拔下，阀门回复到"inject"位置。 4.3.3数据分析方法编辑
4.3.3.1从"view"菜单中，单击"data analysis"进入数据分析画面。
4.3.3.2从"file"菜单中选择"load signal"选项，选中您的数据文件，单击OK。
4.3.3.3做谱图优化，从"graphics"菜单中选择"signal options"选项，从"ranges"中选择"auto scale"及合适的显示时间，单击OK，或选择"use ranges"调整。反复进行，直到图的比例合适为止。
4.3.3.4积分
4.3.3.4.1从"integration"中选择"auto integrate"，如积分结果不理想，再从菜单中选择"integration events"选项，选择合适的"slope sensitivity","peak width","area reject","height reject"。
4.3.3.4.2从"integration"菜单中选择"integrate"选项，则数据被积分。
4.3.3.4.3如积分结果不理想，则重复上两步动作，直到满意为止。
4.3.3.4.4单击左边"√"图标，将积分参数存入方法。
4.3.3.5打印报告
4.3.3.5.1从"report"菜单中选择"specify report"选项，进入。
4.3.3.5.2单击"quantitative results"框中"calculate"右侧的黑三角，选择所需的报告形式，其他选项不变，单击OK。
4.3.3.5.3从"report"菜单中选择"print report"，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击"report"底部的"print"钮。
4.3.4关机
4.3.4.1关机前，先用水和有机溶剂对系统进行梯度冲洗，然后再用有机溶剂冲洗系统，然后关泵（适用于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]
4.3.4.2退出化学工作站，及其他窗口。
4.3.4.3关掉Agilent1100电源开关，计算机（用shut down关）。
4.4.1色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死。
4.4.2对于手动进样器，当使用缓冲液时，要用水冲洗进样口，同时搬动进样阀数次。
4.4.3流动相使用前必须过滤、超声，不能使用多日存放的纯化水（易长菌），应每天更换纯化水。
液相色谱仪利用混合物在液-固或不互溶的两种液体之间分配比的差异，对混合物进行先分离，而后分析鉴定的仪器。一般问题主要有以下几种；
气泡溢出
流动相内有气泡，关闭泵，打开泄压阀，打开purg键，清洗脱气，气泡不断从过滤器冒出，进入流动相，无论打开purge键几次，都无法清除不断产生的气泡。原因过滤器长期沉浸于乙酸铵等缓冲液内,过滤器内部由于霉菌的生长繁殖，形成菌团，阻塞了过滤器，缓冲液难以流畅地通过过滤器，空气在泵的压力作用下经过滤器进入流动相。处理过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，超声清洗几分钟即可；亦可将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小时，轻轻震荡几次，再将过滤器用纯水清洗几次，打开泄压阀，打开purge键清洗脱气，如仍有气泡不断从过滤器冒出，继续将过滤器浸泡于5%硝酸溶液中，如没有气泡不断从过滤器中冒出，说明过滤器内部的霉菌菌团已被硝酸破坏，流动相可以流畅地通过过滤器。打开泄压阀，打开泵，流速调至1.0～3.0ml/min，纯水冲洗过滤器1小时左右。即可将过滤器清洗干净。关闭泄压阀，纯甲醇冲洗半小时即可。
柱压高
⑴缓冲液盐分如（乙酸铵等）沉积于柱内；
⑵样品污染沉积。
处理对于第一种情况先用40～50℃的纯水，低速正向冲洗柱子，待柱压逐渐下降后，相应提高流速冲洗，柱压大幅度下降后，用常温纯水冲洗，之后用纯甲醇冲洗柱子30分钟；对于第二种情况，由样品的沉积引起污染的C18柱，和纯水反向冲洗柱子，换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子，再用换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。
无指示
⑴泵密封垫圈磨损；
⑵大量气泡进入泵体。
处理对于第一种情况，更换密封垫圈；对于第二种情况，在泵作用的同时，用一个50ml的玻璃针筒在泵的出口处帮助抽出空气。
不稳定
原因系统中有空气或者单向阀的宝石球和阀座之间夹有异物，使得两者不能密封。处理工作中注意观察流动相的量，保证不锈钢滤器沉入储液器瓶底，避免吸入空气，流动相要充分脱气。如为单向阀和阀座之间夹有异物，拆下单向阀，放入盛有丙酮的烧杯用超声波清洗。
峰分叉
⑴色谱柱被污染；
⑵柱头填料塌陷。
处理对于第一种情况，先用纯水反向冲洗柱子，然后换成甲醇冲洗，接着用甲醇+异丙醇（4+6）冲洗柱子（冲洗时间的长短由样品污染的情况而定），再换成甲醇冲洗，然后用纯水冲洗，最后甲醇冲洗正向冲洗柱子30分钟以上。如冲洗后依然出峰不佳，则考虑第二种情况。对于第二种情况，拧开柱头，检查柱填料是否硬结或塌陷。去除硬结部分（污染的填料），装入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用与柱内径相同的顶端平滑的不锈钢杆压紧，再填平，滴甲醇，再压紧反复几次，直至装满填平。柱头用甲醇冲洗干净，擦净柱外壁的填料，拧紧柱头，用纯甲醇冲洗30分钟以上。
重复性差
⑴进样阀漏液；
⑵加样针不到位；
⑶液量不足。
处理对于第一种情况更换进样阀垫圈；对于第二种情况保证加样针插到底，注射样品溶液后须快速、平稳地从LOAD状态转换到INJECT状态，以保证进样量的准确。日常工作中，液相色谱仪的保养非常重要，注意不要让空气进入输液系统和高压泵中，储液器内的溶液如长时间未用应清洗储液器并更换溶液，每次用完色谱仪后缓冲液要用纯水冲洗干净，防止无机盐析出或沉积；样品的前处理也很重要，任何样品都要尽可能地去除杂质，完全溶解，尽量减少对色谱柱的污染，以延长色谱柱的使用寿命，同时避免注射过浓的样品溶液，以免残留液在进样阀内析出固体引起堵塞；色谱柱作好标记，用于不同分析目的的色谱柱不要混用等。
研究表明，在高效液相色谱形态分离各种汞化合物和砷化合物的基础上，与原子荧光光谱联用的接口技术是需要解决的关键问题。高效液相色谱与原子荧光光谱仪通过聚四氟乙烯管相连，中间连入微波消解装置（或紫外灯），可以极大的提高有机汞和砷化合物向无机汞和砷化合物的转化，提高其灵敏度。优化聚四氟乙烯管的内径和长度可以得到很好的分离效果。
随着科研和环保部门对测定金属形态越来越高的要求，这一联用装置会拓展到更多元素形态的分析，并以其高的形态分离能力、高的测定灵敏度和性能价格比而得到推广使用。
449717568