色谱柱的使用和维护
色谱柱的使用和维护 卡套柱是默克公司推出的新型环保色谱柱技术，它具有以下的特点：
· 换柱方便：不需要任何工具，仅用双手手指即可以轻松换柱
· 防止渗漏：避免了柱头频繁拆卸而造成的渗漏
· 经济实惠：每次只需要购买柱芯，可以节约40~60%的费用
· 适用性强：可以和任何品牌的液相色谱仪器连接使用
每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"，
而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！-------------一定得做！
新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上的测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。
卡套柱的安装(不加预柱)
1. 将卡套架1套入柱芯2
2. 将两片夹套片3嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夹套
3. 将已套到柱芯上的卡套架1向上推，直至高过夹套片
4. 将卡套帽4和卡套架旋在一起，然后用手拧紧
5. 然后依同样的顺序连接好柱子的另一端
6. 连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手
注意；使用卡套柱时，两端的卡套应时刻连接在柱芯上。不管您是平衡色谱柱或是清洗，任何时候都不能将卡套取下来，否则会造成填料的流失。
卡套柱的安装(加预柱)
1. 将卡套架1套入柱芯2
2. 将两片夹套片3嵌入柱芯的凹槽，使夹套高于 柱芯2
3. 将已套到柱芯上的卡套架1向上推，直至高过夹套片
4. 将"子弹头"预柱放入卡套片内
5. 将卡套帽4和卡套架1旋在一起，然后用手拧紧
6. 然后依同样的顺序连接好柱子的另一端
7. 连接到液相色谱仪，PEEK接头手拧即可；若为不锈钢接头应使用专用扳手
平衡色谱柱
反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用10~20倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水"过渡"。
· 硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡
如何平衡色谱柱？
· 在拿到一根新的色谱柱时，应首先用0.2ml/min的流速将色谱柱平衡过夜，然后将流速升高到1.0ml/min冲洗30分钟，以便将色谱柱的填料充分平衡至较佳状态，这样可以保证色谱柱的使用寿命，并且保证在以后的使用中，获得分析结果的重现性。
· 平衡过程中，将流速缓慢地提高
· 用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂度如果较低，则需要较长的时间来平衡)
色谱柱的再生
色谱柱在使用一段时间后柱效会下降，这时可以考虑对色谱柱进行再生。
进行色谱柱再生时，应使用一个廉价的泵，我们建议：可以不使用您的高效液相色谱仪上的泵。
表1 建议用来冲洗的溶剂体积
色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积
125-41.6ml30ml
250-43.2ml60ml
250-1020ml400ml
请根据下表选择您的再生方法：
极性固定相(如Si, NH2*, DIOL基色谱填料)的再生：
正庚烷 e 氯仿 e乙酸乙酯 e 丙酮 e乙醇e 水**
非极性固定相(如反相色谱填料RP-18,RP-8, CN等)的再生：
水 e乙腈 e 氯仿(或异丙醇) e 乙腈 e 水
0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱
注意：
*在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
**如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M的硫酸冲洗非常有效。
色谱柱的维护：
1. 使用预柱保护分析柱（硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度）
2. 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2~7.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围
3. 避免流动相组成及极性的剧烈变化
4. 流动相使用前必须经脱气和过滤处理
5. 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕将柱子冲洗干净，并保存在乙腈中
6. 压力升高是需要更换预柱的信号
新色谱柱开启和安装的推荐步骤：
1. 开启色谱柱的包装盒，查看色谱的测试报告；
2. 根据色谱柱身上箭头标明的流向先将色谱柱入口端连入系统，柱出口端先不要连接；
3. 0.1 mL/min 流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱，然后在2 min内将流速升至0.5 mL/min;
4. 当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上；
5. 重启流速，然后在0.1 mL/min 流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱30 min，在10 min内将流速升至1.0 mL/min冲洗30 min。
6. 参考柱效测试报告中的方法，30 min内将流动相梯度转换到柱效测试的流动相条件，然后使用5-10倍柱体积的流动相平衡色谱柱，直至压力与基线稳定。
7. 测试柱效。如果柱效与出厂报告偏移过大，或峰形拖尾就需要进行故障排查或联系上海易创分析仪器有限公司。
反相色谱柱的清洗与再生：
1. 发现柱压升高，色谱峰出现严重拖尾、肩峰甚至峰分岔，或分离度降低，有可能是样品溶解度、色谱柱温度、碱性化合物干扰，也很有可能是色谱柱受污染，可以采取以下措施：
2. 如系统有连接在线过滤器或保护柱，首先排查在线过滤器与保护柱，可能需要更新。
3. 使用纯有机相低流速冲洗过夜。（如有使用缓冲盐，应使用不含缓冲液的流动相冲洗1h，然后再梯度过渡到纯有机相低流速冲洗过夜。）
4. 如有机相清洗不能解决问题，可采用如下方法进行色谱柱的清洗和再生。根据样品的性质以及你了解的污染物性质选择清洗方法，用20-30倍柱体积（4.6*250 mm分析色谱柱大约80-120 mL溶剂清洗，流动相温度升至30-50 oC，然后再重复步骤3的方法。
5. 氨基柱
反相色谱柱的保存：
1. 反相色谱柱应保存于纯有机相中（如乙腈或甲醇）。色谱柱使用于高温或极端pH条件下，或停用超过48小时，应当进行简单的清洗过程；
2. 清洗首先用不含缓冲盐的流动相冲洗20-30倍柱体积, 然后30 min内梯度过渡到纯有机相，再用纯有机相冲洗20-30倍柱体积；
3. 后使用原配的柱堵头拧紧，确保堵头溶剂不会挥发。若是氨基柱则应该在步骤2中添加0.1%的氨水，有利于延长氨基柱的寿命；
色谱柱基本上是每个实验室必备的一种实验室耗材，色谱柱的品牌规格很多，每一种色谱柱都应对于相对于的样品分析中。
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